同種異體NK細(xì)胞與人上皮性卵巢癌細(xì)胞之間的免疫編輯.pdf

1、中文摘要同種異體NK細(xì)胞與人上皮性卵巢癌細(xì)胞之間的免疫編輯摘要目的：建立同種異體NK細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞免疫編輯的體外動態(tài)模型，通過檢測免疫編輯前后NKG2D及其主要活化型配體MICA的變化，探討免疫編輯對于NK細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞的影響，探討NKG2DNKG2DL這一免疫殺傷途徑的臨床意義。方法：l體外培養(yǎng)親本細(xì)胞SKOV3(人卵巢漿液性乳頭狀腺癌細(xì)胞)及順鉑耐藥細(xì)胞SKOV3／CDDP，連續(xù)傳代培養(yǎng)，于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。2MTT法檢測

2、不同濃度的順鉑對SKOV3及SKOV3／CDDP的抑制率，計算耐藥細(xì)胞SKOV3／CDDP的耐藥指數(shù)。3用抗CD56抗體免疫磁珠分離純化10例健康志愿者NK細(xì)胞，流式細(xì)胞計數(shù)檢測NK細(xì)胞純度。將NK細(xì)胞分為編輯前組(100U／m11L2培養(yǎng)的NK細(xì)胞)、編輯后組(NK細(xì)胞與卵巢癌細(xì)胞10：1混合，加入100U／m1IL2)，建立體外免疫編輯的動態(tài)模型。4提取免疫編輯前(oh)、免疫編輯后4h、24h、48h4組卵巢癌兩種細(xì)胞的RNA及蛋

3、白，利用realtimePCR及westernblot在RNA水平及蛋白水平檢測MICA的變化。應(yīng)用流式細(xì)胞計數(shù)檢測免疫編輯前后NK細(xì)胞受體NKG2D的變化。以均道值表示MICA蛋白表達(dá)量。均道值=lg(xmode值)x340。結(jié)果：1人卵巢漿液性乳頭狀腺癌SKOV3／CDDP的耐藥指數(shù)=SKOV3／CDDP的IC50值／SKOV3的IC50值即4768／1378=346，介于34之間可進(jìn)行耐藥試驗。2FCM檢測結(jié)果顯示分選后NK細(xì)胞∞