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1、褐藻酸寡糖(Alginate oligosaccharides,AOS)是由2~20個(gè)α-L-古洛糖醛酸(G)或β-D-甘露糖醛酸(M)通過1,4糖苷鍵連接而成的酸性寡糖混合物。大豆抗毒素(Glyceollin)是一種異戊烯化的黃酮類化合物,是大豆在受到外源刺激時(shí)產(chǎn)生的植物抗毒素。研究表明寡糖能夠作為生物誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)大豆中大豆抗毒素的累積。本文主要從單一褐藻酸寡糖的分離純化、檢測(cè),不同褐藻酸寡糖誘導(dǎo)大豆中大豆抗毒素累積效果的比較,褐藻酸寡
2、糖誘導(dǎo)大豆抗毒素累積過程中大豆?fàn)I養(yǎng)品質(zhì)的變化等方面進(jìn)行了研究。
本實(shí)驗(yàn)采用填料為Dowex1×8cL-型陰離子交換樹脂的玻璃層析柱(樹脂粒徑為200-400目),常壓,以50%乙酸作為流動(dòng)相等度洗脫,成功的從褐藻酸寡糖混合物中分離純化出單一聚合度的褐藻酸寡糖。得到的單一聚合度褐藻酸寡糖經(jīng)TLC、HPLC檢測(cè),其純度可以達(dá)到98%。利用UPLC-ESI-MS進(jìn)一步確認(rèn)分離純化得到的單一聚合度褐藻酸寡糖聚合度為2~5。
3、分別采用聚合度為2~5的褐藻酸寡糖作為誘導(dǎo)劑,通過UPLC-ESI-MS確認(rèn)了褐藻酸寡糖具有誘導(dǎo)大豆中大豆抗毒素累積的效果并利用HPLC檢測(cè)大豆中大豆抗毒素的累積量。1%的褐藻酸寡糖混合物、1%的二糖、1%的三糖、1%的四糖和1%的五糖誘導(dǎo)大豆抗毒素的累積量分別為:0.6373mg·g-1大豆干重、1.2339mg·g-1大豆干重、0.3472mg·g-1大豆干重、0.6494mg·g-1大豆干重、1.0611mg·g-1大豆干重,其中
4、1%褐藻酸二糖的誘導(dǎo)效果最為顯著。
本實(shí)驗(yàn)還考察了在褐藻酸寡糖混合物誘導(dǎo)大豆抗毒素累積過程中,大豆中氨基酸、寡糖、大豆異黃酮類化合物、脂肪酸的變化規(guī)律。經(jīng)4%褐藻酸寡糖誘導(dǎo)后,大豆中的異黃酮類化合物、氨基酸、寡糖、脂肪酸等含量均發(fā)生了變化。異黃酮類化合物中,大豆抗毒素在培養(yǎng)第5天時(shí)累積量最高,由誘導(dǎo)前的0.01mg·g-1大豆干重升高到了1.72mg·g-1大豆干重;此時(shí),香豆雌酚含量為664.8μg·g-1大豆干重,染料木素
5、含量為24.03μg·g-1大豆干重,大豆苷元?jiǎng)t由培養(yǎng)0天時(shí)的54.56μg·g-1大豆干重降低到了19.02μg·g-1大豆干重。此時(shí),誘導(dǎo)組大豆中的總氨基酸含量由培養(yǎng)0天時(shí)的39.38%升高到43.45%,且蘇氨酸、蛋氨酸、亮氨酸等必需氨基酸含量也有所升高。非誘導(dǎo)組大豆中的氨基酸含量也有一定程度的提高,但含量總體低于誘導(dǎo)組大豆。誘導(dǎo)組大豆中蔗糖含量由培養(yǎng)0天時(shí)的53.72mg·g-1大豆干重減少到了21.5mg·g-1大豆干重,棉籽
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