雌激素與腎結(jié)石形成的相關(guān)性研究.pdf

1、腎結(jié)石是泌尿外科最常見的疾病之一,而男性發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于女性,但女性病人在絕經(jīng)期后發(fā)病率明顯升高。關(guān)于腎結(jié)石發(fā)病率在性別差異的問題,近10年來的研究多集中在性激素與腎結(jié)石形成的關(guān)系。主要采用草酸鈣結(jié)石的動(dòng)物模型初步闡述了性激素對尿液成分的影響、對腎臟中晶體粘附作用、及鈣相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白的影響,即結(jié)石動(dòng)物的尿睪酮減少,但血睪酮增加;雌性的尿鈣、尿草酸均低于雄性;雌激素可以減少骨橋蛋白(osteopontin)、增加鈣轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白(如TRPV

2、5等)的表達(dá),從而減少尿鈣的排泄,減少結(jié)石晶體形成與沉積,雄激素的作用則剛好相反。從而學(xué)者們推測性激素在腎結(jié)石形成中起重要作用。國內(nèi)已有報(bào)道血清雄激素水平在結(jié)石與非結(jié)石男性之間的差異,但在女性如絕經(jīng)期結(jié)石女性中的性激素水平研究沒有涉及,雌激素對何種成分的結(jié)石有抑制作用、及體外實(shí)驗(yàn)對腎小管上皮細(xì)胞作用的研究,目前也極少涉及,這些研究可能闡釋雌激素在腎結(jié)石形成中的作用及解釋絕經(jīng)后期高發(fā)結(jié)石的發(fā)病機(jī)制提供新的研究思路與方向。
　　研究目

3、的：
　　了解腎結(jié)石發(fā)病率及高發(fā)年齡的性別差異,探討絕經(jīng)期結(jié)石女性性激素水平,及驗(yàn)證我們的假設(shè),即雌激素有抑制腎臟草酸鈣結(jié)石生成的作用,而這種作用途徑是通過增加腎小管上皮細(xì)胞膜TRPV5的表達(dá),增加尿鈣的重吸收,減少尿鈣水平,從而減少了草酸鈣腎結(jié)石形成最重要危險(xiǎn)因素(高鈣尿)的暴露。同時(shí)為今后進(jìn)一步研究性激素在腎結(jié)石形成機(jī)制中的作用提供了新的研究思路。
　　研究內(nèi)容和方法：
　　⒈收集2001年至2010年期間我院所有

4、住院的腎結(jié)石患者的年齡、性別信息,分析其分布特點(diǎn)。
　?、策x取達(dá)到入選標(biāo)準(zhǔn)且接受取石治療的125例絕經(jīng)后的女性患者作為實(shí)驗(yàn)組,和95例體檢合格的絕經(jīng)后女性志愿者作為對照組,留取血漿標(biāo)本,采用化學(xué)發(fā)光法檢測雌二醇及睪酮水平,采用傅立葉轉(zhuǎn)換紅外光譜法測定患者結(jié)石成分。比較二組人群性激素水平及根據(jù)結(jié)石成分是否為草酸鈣結(jié)石行亞組分析性激素水平特點(diǎn)。
　?、程接懘萍に禺惓４龠M(jìn)腎結(jié)石產(chǎn)生的機(jī)制,通過培養(yǎng)人HEK-293細(xì)胞,采用不同終濃

5、度的雌二醇-17β(0,0.1,0.5,1,10,50,100nM)處理細(xì)胞36h,及采用終濃度為10nM的17B-雌二醇處理細(xì)胞0,6,12,24,36,48,72h,應(yīng)用普通PCR和western blot檢測鈣轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白TRPV5的mRNA和蛋白表達(dá)量的變化,最后運(yùn)用帶熒光的Ca2+指示劑Fluo-2NW和激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度和不同作用時(shí)間后細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的水平變化(Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)的影響)。
　　結(jié)果：
　

6、?、惫彩占?3283名腎結(jié)石患者的年齡、性別信息。年齡范圍在1-92歲,平均48±14.8歲。其中35~60歲的患者占62.4％,45~55歲最常見,占28.1%。20歲以下及70歲以上患者較少見,分別占3.2%及5.6%。男性最常見于45~50歲達(dá)到13.4%,女性則最常見于50～55歲,達(dá)到19.5%。整體上男女性別比為1.47:1(59.5%:40.5%),比值最小的年齡段為50～55歲和55~60歲,分別為0.92:1,及1.0

7、7:1。
　?、沧罱K試驗(yàn)組113例,對照組84例入選進(jìn)行分析。結(jié)石分析顯示74例(65.5%)為草酸鈣成分為主,39例(34.5%)非草酸鈣為主?？傮w上腎結(jié)石組雌二醇(E2)明顯低于對照組(21.1±13.54(2-78)vs31.1±16.64(2-94)pg/ml,p<0.001),而血睪酮(T)與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.27±0.19(0.01-0.79)vs.0.26±0.14(0.01-0.68)ng/ml,p=0.78

8、6)。因果分析(Post-hoc analysis)表明此差異是由草酸鈣結(jié)石患者的水平引起的。根據(jù)E2水平的3分位法分組,顯示草酸鈣結(jié)石的發(fā)生頻率隨E2的增加而降低。多因素邏輯回歸分析顯示E2是腎草酸鈣結(jié)石發(fā)生的重要獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素(per 1 SD increase,odds ratio 0.95,p=0.005;highest:lowest tertiles,odds ratio 0.214,p=0.008)。雄激素在各亞組間無差異。此

9、外,E2與年齡、絕經(jīng)年齡及絕經(jīng)時(shí)間無關(guān),但與體重指數(shù)成正相關(guān)。
　?、辰Y(jié)果顯示隨雌二醇的處理濃度增加和處理時(shí)間延長TRPV5mRNA和蛋白的表達(dá)量均增加,在10nM時(shí)和24h的表達(dá)達(dá)到最大。Fluo-2熒光檢測Ca2+濃度,發(fā)現(xiàn)0.1nM的雌二醇處理即可引起胞內(nèi)Ca2+增加,但增加濃度至10nM未引起胞內(nèi)Ca2+的進(jìn)一步增加;而采用10nM的雌二醇處理5min即可引起胞內(nèi)Ca2+急劇增加,但處理3h后測定Ca2+和對照組無差異(p

10、=0.586),處理24小時(shí)后Ca2+又出現(xiàn)明顯增加(p<0.001)。
　　結(jié)論：
　?、蹦行越Y(jié)石發(fā)病高峰年齡比女性可能提前約5年,女性在絕經(jīng)過渡期結(jié)石發(fā)病上升,在絕經(jīng)期后5年內(nèi)(約50～55歲)達(dá)到頂峰,剛好是雌激素水平急劇下降的時(shí)期。
　　⒉雌二醇水平急劇下降(明顯低于同齡正常女性)可能是絕經(jīng)后女性好發(fā)腎結(jié)石的原因之一,且與成分為草酸鈣的結(jié)石的形成明顯相關(guān)。
　　⒊雌二醇能增加鈣通道蛋白TRPV5在mRNA