C-myc基因和DCC基因單核苷酸多態(tài)性與大腸癌易感性的相關(guān)研究.pdf

1、前言
　　大腸癌是常見消化系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來大腸癌的發(fā)病率和死亡率有上升趨勢，發(fā)病年齡逐漸年輕化，研究表明近十年來中國結(jié)直腸癌發(fā)病率為28.08/10萬，死亡率為13.41/10萬，結(jié)直腸癌在惡性腫瘤發(fā)病和死亡構(gòu)成中分別占10.56％和7.80％，居第3位和第5位。大腸癌的發(fā)生、發(fā)展受遺傳、環(huán)境因素及飲食結(jié)構(gòu)的相互作用，其中遺傳因素是一個涉及多步驟、多基因參與的復(fù)雜過程，包括癌基因的激活，抑癌基因的缺失或失活，錯配修復(fù)基因的突變

2、及危險修飾基因改變等，其中癌基因和抑癌基因的異常表達在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。
　　目前對于大腸癌中DCC基因表達異常及功能改變發(fā)生機制的探討主要集中在點突變和等位基因缺失的研究，國外文獻報道，DCC基因位點rs714單核苷酸多態(tài)性(SNP)與食管癌、胃癌易感性密切相關(guān)。GWAS報道多個位于8q24染色體上與大腸癌易感性密切相關(guān)的SNP位點，其中rs6983267與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，8q24上rs6983

3、267位點的單核苷酸多態(tài)性促進C-myc基因的表達，可增強大腸癌患者體內(nèi)Wnt通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。GWAS的另一項研究發(fā)現(xiàn)，DCC基因位點rs7504990SNP顯著增加日本人群中膽囊癌發(fā)病風(fēng)險。國內(nèi)外關(guān)于rs7504990位點SNP與大腸癌發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)研究尚未見報道，本研究通過Taqman探針法檢測DCC基因位點rs7504990SNP并用RFLP-PCR方法檢測rs6983267和rs7008482SNP，并探討其與我國漢族人群大腸癌

4、的遺傳易感性，并就其與臨床參數(shù)的相關(guān)性進行分析。
　　研究方法
　　1、大腸癌標(biāo)本:收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2001年1月-2010年12月經(jīng)病理確診的大腸癌患者475例（男性254例，53.5％;女性221例，46.5％）;并同時收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一院體檢中心，健康體檢者193例（男性105例，54.4％;女性88例，45.6％），其中健康體檢者無大腸癌及其他癌癥及相關(guān)病史，所有納入研究的成員均知情同意。
　

5、　2、基因組DNA提取:采用DNA提取試劑盒提取靜脈血基因組DNA，嚴(yán)格按照操作說明進行。DNA提取后檢測DNA含量，A260/A280為1.6-2.0之間。DNA置-80℃冰箱保存。
　　3、Taqman探針法:將配好實驗體系避光放入Mx3000P熒光定量PCR儀，95℃，30s預(yù)變性;95℃，5s，60℃，20s，50個循環(huán)后分析實驗結(jié)果。
　　4、RFLP-PCR方法:將配好實驗體系放入PCR儀，95℃預(yù)變性10min

6、,95℃30s，50℃(rs7008482)，49℃(rs6983267)，72℃30s，35個循環(huán)，72℃10min。PCR產(chǎn)物(rs6983267-Tsp45I，rs7008482-CviQI)行酶切反應(yīng)，于37℃水浴過夜(不超過16h)，5％瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。
　　5、統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　研究結(jié)果
　　1、病例組和對照組基因型:我

7、們研究發(fā)現(xiàn)，rs7504990位點中CC基因型與TT基因型、TC基因型及TC+TT基因型之間;rs7008482位點中GT基因型與TT基因型間以及rs6983267位點中各基因型間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，其余均呈現(xiàn)明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2、2、病例組和對照組基因型:我們研究發(fā)現(xiàn)，rs7504990位點中CC基因型與TT基因型、TC基因型及TC+TT基因型之間呈顯著統(tǒng)計學(xué)差異;rs7008482位點中TT基因型與GG基因型及GT+TT基因

8、型間呈顯著統(tǒng)計學(xué)差異;rs6983267位點中各基因型間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，結(jié)果見表3。
　　3、本研究對病例組內(nèi)其他臨床特征與基因型之間也進行了統(tǒng)計學(xué)分析，其中rs6983267位點與病例組吸煙史及癌癥家族史呈現(xiàn)明顯統(tǒng)計學(xué)差異;rs7008482位點與病例組腫瘤大小、Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)明顯統(tǒng)計學(xué)差異;rs7504990位點與病例組各臨床指標(biāo)未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異，其中具有統(tǒng)計學(xué)差異者進行l(wèi)ogistic回歸分析。
　

9、　4、最后，本研究將上述三個位點就其野生型與突變型進行統(tǒng)計分析，對照組中三位點野生型計數(shù)為零，因此，我們只將其與各臨床指標(biāo)進行統(tǒng)計分析，其中，腫瘤分化程度高低及有無吸煙史間存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　討論
　　本研究提示DCC基因位點rs7504990SNP可顯著增加我國漢族大腸癌發(fā)病風(fēng)險，其中TC、TT、TC+TT等基因型與CC基因型比較均呈現(xiàn)顯著統(tǒng)計學(xué)差異，rs7008482位點亦可顯著增加我國漢族大腸癌發(fā)病風(fēng)險，其中TT

10、基因型與GG基因型及GT+TT基因型間呈顯著統(tǒng)計學(xué)差異。在我國漢族人群中，rs7008482位點增加吸煙人群大腸癌患病率;亦可增加有癌癥家族史者大腸癌的發(fā)病風(fēng)險。rs7008482位點SNP與大腸癌Dukes分期顯著相關(guān)，且此位點的單核苷酸多態(tài)性的大腸癌患者較易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。三位點SNP聯(lián)合檢測，rs7504990TC+TT-rs6983267GT+TT-rs7008482GT+GG可大大增加吸煙者大腸癌的發(fā)病風(fēng)險，并結(jié)合臨床其他檢查

11、手段，可提高無癌癥家族史人群中大腸癌篩查及基因治療的準(zhǔn)確率，在臨床診治及預(yù)防中更具意義。
　　研究結(jié)論
　　1、SNP位點rs7504990、rs7008482可顯著增加我國漢族人群大腸癌易感性。
　　2、在我國漢族人群中，rs6983267SNP可顯著增加吸煙人群大腸癌患病率;亦可增加有癌癥家族史者大腸癌的發(fā)病風(fēng)險。
　　3、在我國漢族人群中，rs7008482位點SNP與大腸癌Dukes分期顯著相關(guān)，且此位點