XPC-XPG單核苷酸多態(tài)性與中國大腸癌患者發(fā)病風險及預(yù)后相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　 大腸癌(結(jié)直腸癌)是最常見的惡性腫瘤之一。從全世界的范圍來看,大腸癌的發(fā)生率在亞洲人群中相對較低。但近年來,隨著人們生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變以及遺傳因素等影響,我國大腸癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。目前,以奧沙利鉑為基礎(chǔ)的化療是治療大腸癌的一線方案,但不同患者接受相同藥物及劑量進行治療時對化療藥物所產(chǎn)生的敏感性卻存在較大的差異。
　　 DNA修復(fù)系統(tǒng)在影響大腸癌患者對奧沙利鉑藥物敏感性方面占據(jù)著主導(dǎo)地位

2、。核苷酸切除修復(fù)(NER)是DNA修復(fù)系統(tǒng)重要的一部分,它能夠清除大量鉑類藥物所致的DNA螺旋結(jié)構(gòu)扭曲。由于DNA修復(fù)基因存在單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotidepolymorphism,SNP),它能夠影響蛋白質(zhì)的編碼并且在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上起作用,導(dǎo)致DNA的修復(fù)能力不同,進而可以預(yù)測大腸癌的發(fā)病風險及患者對鉑類等化療藥物的敏感性。若核苷酸切除修復(fù)發(fā)生缺陷則可能導(dǎo)致著色性干皮病,著色性干皮病患者在陽光持續(xù)照射下會增加皮膚癌

3、的發(fā)病風險。最近,一些研究闡述了著色性干皮病家族C(XPC)和著色性干皮病家族G(XPG)的基因多態(tài)性與大腸癌發(fā)病風險的相關(guān)性。
　　 XPC基因產(chǎn)物在DNA損傷識別過程中發(fā)揮著重要的作用。目前,僅有少數(shù)研究驗證了XPCLys939Gln(A-to-Ctransitionin3p25exon15)和大腸癌發(fā)病風險間的相關(guān)性。WuY等人(2011)證實XPCLys939Gln基因突變能夠提高大腸癌的發(fā)病風險;但Hansen等人(2

4、007)及其他研究并沒有發(fā)現(xiàn)Lys939Gln基因突變與大腸癌發(fā)病相關(guān)。同樣,XPG基因也是著色性干皮病家族中的重要一員,它能夠編碼1186-氨基酸特殊結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶,并負責切除錯配DNA的3'端。研究表明XPGAsp1104His(G-to-Ctransitionin13q33exon15)位點的基因多態(tài)性和乳腺癌(2003)及肺癌(2003)的發(fā)病風險相關(guān),但尚未見Asp1104His和大腸癌發(fā)病風險具有相關(guān)性的報道。
　　

5、 上述研究表明這個位點的多態(tài)性結(jié)果并不一致,需要進一步深入的研究去證實。另外,在這兩個基因位點中,尚未見伴有腫瘤血清標記物及術(shù)后化療療效的多態(tài)性分析。因此,對這兩個位點與大腸癌的發(fā)病風險、疾病進展以及個體化療用藥方案的相關(guān)性研究還是很有必要的。我們在XPCLys939Gln、XPGAsp1104His位點進行單核苷酸多態(tài)性檢測,并考察伴有腫瘤血清標志物、相關(guān)臨床病理參數(shù)、治療方案及預(yù)后情況的影響。旨在研究XPC及XPG多態(tài)性和大腸癌發(fā)

6、病風險的相關(guān)性,為闡明大腸癌的發(fā)生發(fā)展提供實驗依據(jù)。
　　 實驗方法：
　　 1、本研究采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例一對照研究方法。病例組選自2008年1月-2011年7月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院進行住院治療,經(jīng)組織病理學(xué)確診,未經(jīng)放射和抗癌藥物治療的1028例大腸癌新發(fā)病例;對照組為同期在同一醫(yī)院體檢中心進行健康體檢且體檢結(jié)果正常、無腫瘤病史及遺傳病史且年齡、性別分別與病例組相匹配的1085例健康人群。在收集血漿樣品標本的

7、同時,收集每個研究對象的人口學(xué)資料及臨床病理參數(shù)資料。
　　 2、采用碘化鉀法從抗凝血中提取基因組DNA。接下來,通過聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PoylmcaresChinReactionRestrictionFragmentLengthPoylmorphism,PCR-RFLP)的方法,檢測XPCLys939Gln及XPGAsp1104His位點基因型。各基因引物設(shè)計如下:XPCLys939Gln:5'-ACCAGC

8、TCTCAAGCAGAAGC-3'和5'-CTGCCrCAGTTTGCCTTCTC-3';XPGAsp1104His:5'-GACCTGCCTCTCAGAATCATC-3'和5'-CCTCGCACGTCTrAGTTTCC-3'。電泳分析PCR產(chǎn)物,并對其進行酶切;XPCLys939Gln、XPGAsp1104His基因位點對應(yīng)的內(nèi)切酶分別是PvuⅡ、Hsp92Ⅱ。取0.25μl產(chǎn)物與相應(yīng)的限制性核酸內(nèi)切酶0.5μl于水浴37℃過夜,用3

9、%瓊脂糖凝膠電泳分析酶切產(chǎn)物。
　　 3、統(tǒng)計學(xué)分析:采用卡方檢驗比較各位點多態(tài)基因型在病例組與對照組之間的分布差異,運用Logstic回歸模型計算優(yōu)勢比(Oddsratio,OR)及其95%可信區(qū)間(95%confidenceinterval,95%CI),用OR及95%CI表示相對危險度。通過Kaplan-Meier的統(tǒng)計學(xué)方法預(yù)測大腸癌患者化療后的生存情況,通過單因素及多因素Cox模型分析影響大腸癌發(fā)病的因素。所用統(tǒng)計軟件

10、為SPSS16.0。
　　 結(jié)果：
　　 1、在XPCLys939Gln位點中,大腸癌患者基因型AA、AC、CC的分布人數(shù)及頻率分別為360(35.02%)、565(54.96%)、103(10.020/o);健康對照組人群基因型AA、AC、CC的分布人數(shù)及頻率則分別為453(41.75%)、500(46.08%)、132(12.17%)。攜帶基因型AC(OR=1.400,95%CI=1.164-1.685,P＜0.00

11、1)及AC+CC(OR=1.309,95%CI=1.096-1.563,P=0.001)的個體比攜帶基因型AA的個體具有更高的腫瘤發(fā)病風險。
　　 2、在XPGAsp1104His位點中,大腸癌患者基因型GG、GC、CC的分布人數(shù)及頻率分別為233(22.67%)、603(58.66%)、192(18.67%),健康對照組人群基因型GG、GC、CC的分布人數(shù)及頻率則分別為329(35.39%)、537(49.49%)、219(1

12、5.12%),攜帶基因型GC(OR=1.332,95%CI=1.090-1.629,P＜0.001)及GC+CC(OR=1.201,95%CI=0,992-1.455,P＜0.001)的個體比攜帶基因型GG的個體具有更高的腫瘤發(fā)病風險。
　　 3、在對性別、年齡和吸煙情況進行校正后我們發(fā)現(xiàn),XPCLys939Gln的基因型AC+CC(OR=0.654,95%CI:0.448-0.954,P=0.027)以及XPGAsp1104H

13、is的基因型GC+CC(OR=0.530,95%CI:0.348-0.809,P=0.003)均能夠掩蓋術(shù)前癌胚抗原(CEA)指標值的升高,并與術(shù)前CEA指標值的升高呈負相關(guān)。
　　 4、XPCLys939Gln和XPGAsp1104His與病理分期(DukesAtoDukesD)、腫瘤分化(Grade1,Grade2,Grade3)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、腫瘤大小、吸煙情況、是否有大腸癌家族史、復(fù)發(fā)情況、原發(fā)癌位置(結(jié)腸或者直腸)等

14、臨床病理參數(shù)均無相關(guān)性。
　　 5、我們采用Kaplan-Meier的方法預(yù)測化療藥物中含有奧沙利鉑的大腸癌患者的預(yù)后情況。發(fā)現(xiàn)攜帶有XPGAsp1104His基因型GG的患者發(fā)展為進展期的中位生存時間為65.895個月(95%CI=48.206-83.584),而攜帶有基因型GC+CC的人群僅為38.877個月(95%CI=30.123-47.631),兩者比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(log-rank;P=0.033);基因型GC+C

15、C的危害比(HR)是基因型GG的1.692倍。
　　 6、為了評估影響預(yù)后的每個獨立風險因素,我們建立了COX獨立風險模型。單因素風險分析表明XPGAsp1104His(GC+CCvsGG)、病理分期(DukesB/DukesC/DukesDvsDukesA)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)(轉(zhuǎn)移vs未轉(zhuǎn)移)及腫瘤大小(＞2cmvs≤2cm)與以奧沙利鉑為主要化學(xué)治療方案的患者相關(guān)。最后,多因素COX風險分析表明,XPGAsp1104His(O

16、R=1.692,95%CI:1.202-2.383,P=0.003)、病理分期(OR=2.545,95%CI:2.139-3.030,P＜0.001)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)(OR=1.851,95%CI:1.306-2.625,P＜0.001)均不利于大腸癌患者的預(yù)后。
　　 結(jié)論：
　　 1、XPC、XPG基因可能是大腸癌易感的候選基因。
　　 2、XPCLys939基因型AC及XPGArg1104His基因型GC均

17、可能是影響中國地區(qū)大腸癌發(fā)病風險的因素。
　　 3、XPCLys939Gln的基因型AC+CC及XPGAsp1104His的基因型GC+CC均能夠掩蓋術(shù)前癌胚抗原(CEA)指標值的升高。結(jié)果提示我們基因型AC+CC及GC+CC可能對腫瘤的確診造成干擾,對就診患者進行SNP基因型鑒定或許更具有臨床意義。
　　 4、攜帶有XPGAsp1104His基因型GG的患者比攜帶有基因型GC+CC的患者具有更長的術(shù)后無進展生存期。結(jié)果