豬A組輪狀病毒Vp6基因工程乳酸菌的制備及其免疫效果檢測.pdf

1、該項研究分為兩個階段：乳酸菌基因工程疫苗實驗室研究階段和免疫實驗動物檢測階段?；厥占兓玫截iA組輪狀病毒 Vp6 基因以及質粒載體pW425et。將純化的Vp6基因亞克隆至雙標記載體 pW425et中，構建出可以在大腸桿菌和乳酸桿菌中穿梭表達的原核表達重組質粒 pW425et-Vp6。將構建的重組質粒轉化入thyA基因缺陷型的大腸桿菌E.coli X13中，SDS-PAGE檢測，可見約48kD的融合蛋白。Western blotting

2、分析，表明蛋白具有與豬輪狀病毒多克隆抗體的反應原性，重組質粒轉化入乳酸桿菌中，SDS-PAGE檢測，可見約48kD的融合蛋白。Western blot分析，表明該蛋白同樣具有與豬輪狀病毒多克隆抗體的反應原性。轉化入重組質粒的嗜酸性乳酸桿菌即為免疫用基因工程乳酸菌。 將購自吉林大學基礎部實驗動物中心的3-4周齡BALB/c小鼠分成4組，每組20只，分別是A組：空對照組；B組：普通嗜酸性乳酸桿菌組；C組：重組基因工程大腸桿菌組；4組

3、：重組基因工程乳酸桿菌組。小鼠購進之日起，每日定時、定量飼喂溶于脫脂牛奶中的乳酸菌。在第0、14、28、42天取小鼠糞便表層，通過間接ELISA檢測腸道特異性抗體SIgA，間接ELISA檢測血清中的特異性抗體。以及對CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>T淋巴細胞相對數量檢測和CD<'+>19B淋巴細胞相對數量的檢測。 免疫后機體在免疫水平上的變化如下：體液免疫水平顯著提高，表現在血清中抗輪狀病毒特異性IgA的含量明顯上

4、升，CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>、CD3<'+>/CD4<'+>、CD3<'+>/CD8<'+>、CD4<'+>/CD8<'+>T淋巴細胞相對數量的變化也反應出機體良好的免疫狀態(tài)。研究證明機體已經通過該疫苗的免疫具備了預防輪狀病毒感染的能力。局部免疫方面，刺激腸道上皮組織中的固有層細胞分泌出了大量的 SIgA，使輪狀病毒最容易侵害的胃腸道出現了一種有效對抗感染的免疫環(huán)境。SIgA的含量明顯提高，是抵御輪狀病毒感染最重要