D型沙眼衣原體質粒蛋白pgp3的克隆、表達、鑒定及其免疫原性初探.pdf

1、[目的]獲得D型沙眼衣原體質粒蛋白pgp3基因及其蛋白，制備鼠源性多克隆抗體，鑒定蛋白免疫原性。
　　[方法]聚合酶鏈反應(PCR)擴增目的基因，將其插入pZeroBack載體，對pZeroBack/pgp3和原核表達載體pGEX-6p-1進行酶切后連接，產(chǎn)物轉化入大腸埃希菌DH5α，提取質粒進行酶切、測序、PCR鑒定。再將重組質粒轉化入大腸埃希菌BL21并經(jīng)IPTG誘導表達，Western印跡鑒定目的蛋白，GST磁珠(GST M

2、agBeads)純化pgp3-谷胱甘肽巰基轉移酶融合蛋白（pgp3-GST融合蛋白）。用純化后的蛋白免疫Balb/c小鼠，制備多克隆抗體，Western印跡、細胞免疫熒光鑒定抗體的特異性，間接ELISA法測定抗體滴度。
　　[結果]克隆目的基因測序長度為795bp，序列與GeneBank中一致，Western印跡顯示目的蛋白分子量約為54000，并得到純化的蛋白。獲得鼠源性多克隆抗體，經(jīng)Western印跡和細胞免疫熒光鑒定抗體可特