斑蝥素抑制乳腺癌細(xì)胞與血小板粘附的機(jī)制研究.pdf

1、【目的】
　　血小板在腫瘤血行轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮重要作用。有研究顯示腫瘤細(xì)胞表面的整合素（Integrin）α2、β1參與了腫瘤細(xì)胞與血小板的粘附過程。有研究顯示斑蝥素（Cantharidin）及其衍生物對(duì)包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤具有抗腫瘤活性。目前尚不清楚斑蝥素類藥物是否能夠影響腫瘤細(xì)胞與血小板的粘附過程。斑蝥素及其衍生物是蛋白磷酸酶2A（Protein Phosphatase2A，PP2A）的抑制劑。PP2A被抑制后，可導(dǎo)致多個(gè)

2、信號(hào)通路中的關(guān)鍵激酶被激活。本研究擬檢測(cè)斑蝥素及其衍生物，去甲斑蝥素（Norcantharidin，NCTD），對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MCF-7生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響，著重研究Cantharidin及Norcantharidin對(duì)乳腺癌細(xì)胞與血小板之間粘附能力的影響，并探討其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　【方法】
　　通過四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT法）檢測(cè) Cantharidin和 Norcantharidin對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖能力

3、的影響；通過平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè) Cantharidin和Norcantharidin對(duì)MCF-7細(xì)胞克隆形成能力的影響；通過流式細(xì)胞術(shù)（Annexin-V/PI雙染法）檢測(cè)Cantharidin和Norcantharidin對(duì)MCF-7細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用；通過劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Cantharidin和Norcantharidin對(duì)MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響；通過MTT法檢測(cè) Cantharidin和Norcantharidin對(duì)MCF-7

4、細(xì)胞粘附能力的影響；通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞與CFDA-SE（Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester）標(biāo)記的洗滌血小板的粘附能力；應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，real-time PCR）檢測(cè)Cantharidin和Norcantharidin對(duì)MCF-7細(xì)胞中整合素α2、β1 mRNA表達(dá)的影響。通過

5、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Cantharidin和Norcantharidin對(duì)MCF-7細(xì)胞表面整合素（Integrin）α2蛋白分布的影響。通過小干擾RNA（Small interfering RNA，siRNA）或信號(hào)通路抑制劑阻斷激酶通路進(jìn)行信號(hào)通路研究。
　　【結(jié)果】
　　1. Cantharidin和Norcantharidin抑制MCF-7細(xì)胞增殖，呈劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)。2. Cantharidin和 Norcanthar

6、idin抑制 MCF-7細(xì)胞克隆形成，呈劑量依賴效應(yīng)。3. Cantharidin和Norcantharidin誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡，呈劑量依賴效應(yīng)。4. Cantharidin和 Norcantharidin抑制 MCF-7細(xì)胞粘附，呈劑量依賴效應(yīng)。5. Cantharidin和Norcantharidin抑制 MCF-7細(xì)胞遷移，呈劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)。6. Cantharidin和Norcantharidin抑制MCF-7細(xì)胞整合

7、素α2 mRNA表達(dá)，而對(duì)整合素β1 mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯影響。7. Cantharidin和Norcantharidin下調(diào)MCF-7細(xì)胞表面整合素α2蛋白水平。8. Cantharidin和Norcantharidin通過下調(diào)整合素α2表達(dá)抑制MCF-7細(xì)胞與血小板的粘附。9.阻斷PKC通路可削弱Cantharidin和Norcantharidin對(duì)Integrinα2表達(dá)的抑制作用，而阻斷ERK、JNK、NF-κB通路則無(wú)明顯影

8、響。
　　【結(jié)論】
　　Cantharidin和Norcantharidin能夠抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、遷移能力。建立了基于流式細(xì)胞術(shù)的腫瘤細(xì)胞和血小板粘附的檢測(cè)技術(shù)，采用該技術(shù)我們發(fā)現(xiàn) Cantharidin和 Norcantharidin可以抑制腫瘤細(xì)胞與血小板的粘附。Cantharidin和Norcantharidin通過PKC通路下調(diào)整合素α2的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞與血小板的粘附，從而抑制乳腺癌細(xì)胞血行轉(zhuǎn)