微囊藻毒素LR雌性性腺毒性及對(duì)雌孕激素分泌的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)體內(nèi)和體外模型，觀察MC-LR雌性性腺毒性及對(duì)雌孕激素分泌的影響，為MC-LR的生殖毒性作用及機(jī)制研究提供新的線索和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.體內(nèi)染毒實(shí)驗(yàn)：成年健康雌性清潔級(jí)昆明種小鼠48只（經(jīng)篩選后小鼠動(dòng)情周期相對(duì)規(guī)律的），按體重隨機(jī)分為4組，每組12只，染毒劑量分別為0、3.75、7.5和15μg/kg。每天按體重腹腔注射MC-LR一次，連續(xù)染毒16天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，于小鼠動(dòng)情間期處死，觀察指標(biāo)包

2、括體重、動(dòng)情周期、子宮和卵巢及肝腎臟器系數(shù)、子宮和卵巢組織病理、血清激素水平、卵巢組織Star、P450scc和P450arommRNA表達(dá)。
　　2.體外染毒實(shí)驗(yàn)：無(wú)菌條件下分離提取21日齡雌性昆明種小鼠卵巢顆粒細(xì)胞，以0、5、10、20μg/ml MC-LR染毒卵巢顆粒細(xì)胞，分別檢測(cè)染毒24h、48h、72h細(xì)胞增殖情況和細(xì)胞培養(yǎng)液中雌二醇（E2）和孕酮（P）含量；以0、5、10、20μg/ml MC-LR染毒小鼠卵巢顆粒細(xì)胞

3、48h，并設(shè)CAT+20μg/ml MC-LR干預(yù)組和CAT對(duì)照組，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ROS含量及卵巢顆粒細(xì)胞StAR、P450scc和P450arommRNA的表達(dá)
　　結(jié)果：
　　體內(nèi)染毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.染毒結(jié)束，最高劑量組體重低于對(duì)照組（P<0.05)；7.5和15μg/kg劑量組子宮和卵巢臟器系數(shù)低于對(duì)照組（P<0.05)，而肝臟臟器系數(shù)高于對(duì)照組（P<0.05)；15μg/kg劑量組腎臟臟器系數(shù)高于對(duì)照組（P<0.

4、05)。
　　2.7.5μg/kg劑量組動(dòng)情期延長(zhǎng)，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)；15μg/kg劑量組與對(duì)照組比較動(dòng)情間期延長(zhǎng)并伴有動(dòng)情周期的延長(zhǎng)（P<0.05)。
　　3.卵巢組織學(xué)觀察：3.75和15μg/kg劑量組閉鎖卵泡數(shù)目與對(duì)照組比較呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（P<0.05)，而成熟卵泡數(shù)目與對(duì)照組比較呈下降趨勢(shì)（P<0.05)；3.75μg/kg劑量組與對(duì)照組比較初始卵泡數(shù)目下降(P<0.05)，黃體數(shù)目上升（

5、P<0.05)；7.5ug/kg劑量組可見(jiàn)較多生長(zhǎng)卵泡（P<0.05）。
　　4.血清孕酮水平隨著劑量的上升呈下降趨勢(shì)；雌二醇呈上升的趨勢(shì)，其中15μg/kg劑量組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)；各劑量組血清FSH和LH未能檢測(cè)出。
　　5.與對(duì)照組比較，15μg/kg劑量組StarmRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05)，7.5和15μg/kg劑量組P450sccmRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05)，各劑量組P450ar

6、ommRNA表達(dá)無(wú)差異。
　　體外染毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.MC-LR染毒24 h，20μg/mL劑量組顆粒細(xì)胞的增殖活性高于對(duì)照組（P<0.05)；而染毒48和72 h，20μg/mL劑量組低于對(duì)照組（P<0.05)。
　　2.MC-LR染毒24 h，低、高劑量組卵巢顆粒細(xì)胞雌二醇的分泌量與對(duì)照組比較升高（P<0.05)；染毒48h，各劑量組雌二醇分泌無(wú)差異；染毒72 h，各染毒組雌二醇的分泌量均明顯低于對(duì)照組（P<0.

7、05）。
　　3.MC-LR染毒24h和72h各染毒組卵巢顆粒細(xì)胞孕酮分泌量均低于對(duì)照組（P<0.05），染毒48h各染毒組分泌量呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，5μg/ml明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。
　　4.MC-LR染毒48h，高劑量組小鼠卵巢顆粒細(xì)胞內(nèi)ROS含量與對(duì)照組比較上升（P<0.05），CAT可抑制顆粒細(xì)胞內(nèi)ROS生成。
　　5.MC-LR染毒48h，小鼠卵巢顆粒細(xì)胞StarmRNA表達(dá)上調(diào)，P450scc表達(dá)下調(diào)

8、。與對(duì)照組比較，10、20μg/ml組Star和P450scc mRNA表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；P450arommRNA僅10μg/ml組表達(dá)下調(diào)，與對(duì)照組比較（P<0.05）。CAT干預(yù)對(duì)MC-LR所致Star、P450scc、P450arommRNA表達(dá)改變未見(jiàn)明顯影響。
　　結(jié)論：
　　MC-LR存在小鼠雌性性腺毒性并影響雌孕激素分泌，MC-LR可能通過(guò)影響雌孕激素合成過(guò)程中關(guān)鍵酶Star、P450sc