微囊藻毒素MC-LR純品的制備工藝研究.pdf

1、近幾十年來,藍藻水華引起的淡水湖泊污染逐漸加劇。最近幾年我國云南滇池、江蘇太湖等地藍藻水華的爆發(fā)程度逐年加劇,其釋放的主要有害物質為微囊藻毒素(microcystins,MCs)。微囊藻毒素-LR作為MCs的主要異構體,其標樣是飲用水水質非常規(guī)指標檢測所需要的主要標準樣品之一。目前,微囊藻毒素異構體純品的提取、純化與制備等方面的研究國內外文獻報道很多,涉及固相萃取、高效液相色譜、薄層層析等。但我國對于從藍藻中提取與制備MC-LR的研究尚

2、未形成成熟的方法,所需要的標準品幾乎全部從國外進口。
　　 本研究以從云南滇池得到的天然藍藻為原料,通過對藍藻提取藻毒素的提取條件、藻毒素異構體混合物分離條件、微囊藻毒素-LR制備條件等三個方面開展深入研究,得到了能夠滿足水質監(jiān)測要求的MC-LR標準品。并對得到的樣品通過HPLC-MS進行了表征。
　　 對從天然藍藻中提取微囊藻毒素異構體的條件進行了探索與優(yōu)化。研究了不同溶劑體系,提取手段及提取時間等因素對藻渣中微囊藻毒

3、素提取效果的影響,得到了微囊藻毒素粗提的最佳條件:以甲醇/水(65％v/v)作為提取溶劑在室溫條件下,磁力攪拌1.5h,超聲20min萃取得到粗提液,然后用0.45μm的微濾膜過濾去除大分子物質以及纖維等雜質,得到MCs的粗品。MCs粗品通過固相萃取手段進行前期純化,探索了固相萃取過程中淋洗液與洗脫液的配比對純化效果的影響,70％洗脫液可以將微囊藻毒素最大限度地從固相萃取柱上洗脫下來。
　　 使用高效液相色譜(HPLC)手段對所

4、提取的微囊藻毒素的異構體粗品進行純化分離,考察了不同比例、不同種類的流動相等色譜條件對MCs異構體分離效果的影響,得到了微囊藻毒素異構體的最佳色譜分離條件:流動相:乙腈/水溶液(80％v/v);柱溫:室溫;檢測波長:238 nm;流速:0.5 mL/min;進樣量:2μL。微囊藻毒素的三種主要異構體在此條件下可以得到良好的分離。
　　 利用制備型高效液相色譜對微囊藻毒素主要異構體進行制備分離,通過探討不同比例的流動相及進樣量對制

5、備效果的影響,得到最佳制備色譜條件:流動相:乙腈/水溶液(50％v/v);柱溫:室溫;檢測波長:238 nm;流速:2 mL/min;進樣量:100μL。收集10組色譜峰對應的組分,各組分在高效液相色譜上進行色譜和光譜分析(DPD),微囊藻毒素的主要三種異構體MC-LR、MC-RR以及MC-YR可以基本定性,其中MC-LR的純度超過90％。以HPLC-MS對制備得到的MC-LR進行了表征,分子離子峰和相關的特征峰與MC-LR相符。