蓖麻RcNHX1基因的功能分析.pdf

1、雞毒支原體的分離鑒定及基因免疫的研究蓖麻RcNHX1基因的功能分析FunctionalAnalysisofRcNHX1GeneinCast(RicinuscommunisL.)申請(qǐng)人：馮紫洲學(xué)科專業(yè)：作物學(xué)研究方向：作物生物技術(shù)學(xué)位類別：學(xué)術(shù)學(xué)位指導(dǎo)教師：陳永勝教授張繼星教授論文提交日期：二○一七年六月碩士學(xué)位論文分類號(hào)035.3ICS學(xué)校代碼10136學(xué)號(hào)201400002摘要土壤鹽堿化一直是亟待解決的世界性農(nóng)業(yè)難題之一，嚴(yán)重影響了全

2、球農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及生態(tài)環(huán)境的保護(hù)。利用基因工程選育耐鹽作物品種，已成為利用和改良鹽堿地的一條經(jīng)濟(jì)有效途徑。近年來，隨著蓖麻產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人們對(duì)蓖麻的生產(chǎn)和加工的重視程度越來越高，而針對(duì)蓖麻耐鹽相關(guān)基因的發(fā)掘和利用的研究較少。為了挖掘耐鹽相關(guān)基因，本研究以當(dāng)?shù)刂魍频墓歉勺越幌低ū?號(hào)為材料，利用RACEPCR的方法成功克隆了蓖麻液泡膜NaH逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(vacuolarNaHantipterNHX)基因RcNHX1。RcNHX1基因包括一個(gè)

3、完整的開放閱讀框，推測(cè)編碼544個(gè)氨基酸。亞細(xì)胞定位試驗(yàn)表明RcNHX1融合蛋白主要積累于細(xì)胞膜與液泡膜。以蓖麻子葉節(jié)為外植體，構(gòu)建植物過表達(dá)載體、干擾載體，利用農(nóng)桿菌進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。PCR和Southernblot檢測(cè)表明共獲得2個(gè)穩(wěn)定遺傳的過表達(dá)株系。對(duì)過表達(dá)RcNHX1轉(zhuǎn)基因蓖麻在苗期抗鹽表型鑒定發(fā)現(xiàn)：150mmolLNaCl處理14d后，轉(zhuǎn)基因植株的株高和干重均顯著高于野生型。鹽脅迫后，轉(zhuǎn)基因植株脯氨酸的含量顯著高于野生型，而丙二