巖黃連干燥過(guò)程中生物堿的變化及其抗氧化活性研究.pdf

1、巖黃連(Yanhuanglian)，系罌粟科紫堇屬多年生草本植物石生黃堇Corydalis saxicola Bunting的全草，是黔桂高寒山區(qū)珍貴的中草藥材，其性苦、寒，具有清熱、消腫、止血、止痛、利濕、拔毒等作用，民間用于口舌糜爛，目赤，急性腹痛，肝炎，肝硬化，痢疾，痔瘡出血，晚期癌痛等。在臨床巖黃連注射液用于肝炎、肝硬化等疾病的治療，療效顯著，脫氫卡維汀是其主要藥效成分之一。
　　 本論文前期研究發(fā)現(xiàn)巖黃連新鮮樣品與干燥

2、樣品之間的化學(xué)成分組成差異很大，干燥方法對(duì)藥材中化學(xué)成分組成的影響也很大。巖黃連藥材質(zhì)量將會(huì)直接影響其藥效，鑒于此，本文首先對(duì)巖黃連藥材(全草、根、莖、葉、花)中的生物堿成分進(jìn)行了干燥過(guò)程的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，以期對(duì)巖黃連藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。隨后，研究建立了巖黃連中主要生物堿成分的高速逆流色譜分離純化方法，可為巖黃連藥材的化學(xué)對(duì)照品研究以及深入的藥理活性研究提供必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。最后，采用DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，?duì)巖黃連生物堿不同提取物

3、部位和10種生物堿成分的抗氧化活性進(jìn)行了研究。
　　 主要研究結(jié)果總結(jié)如下：
　　 1.巖黃連生物堿干燥過(guò)程中的動(dòng)態(tài)分析。
　　 總生物堿研究的結(jié)果表明，根、葉、花三部位在采收后干燥過(guò)程的1天或者1.5天內(nèi)，總生物堿含量達(dá)到最大值，然后在干燥過(guò)程中迅速下降，從0.5～6天的干燥過(guò)程中，總生物堿含量分別下降了11.3％，22.2％，6.7％；莖在干燥過(guò)程的1.5天內(nèi)，總生物堿含量達(dá)到最低值，隨后在干燥過(guò)程中迅速上升

4、，與根、葉、花三者的變化趨勢(shì)完全相反，至第6天莖的總生物堿含量上升了12.8％；全草總生物堿含量上升了15.3％。
　　 巖黃連生物堿成分在干燥過(guò)程中動(dòng)態(tài)分析結(jié)果表明，巖黃連藥材(全草、根、莖、葉、花)中的卡維汀含量與脫氫卡維汀含量呈負(fù)相關(guān)，預(yù)示了卡維汀可能轉(zhuǎn)化為脫氫卡維汀，在巖黃連藥材中存在著脫氫酶，且干燥失水促使酶的活性增強(qiáng)。進(jìn)一步考察對(duì)比了巖黃連藥材中另外兩對(duì)與卡維汀-脫氫卡維汀結(jié)構(gòu)類似的叔胺堿-季胺堿：碎葉紫堇堿-去氫碎

5、葉紫堇堿、四氫巴馬汀-巴馬汀，并未觀察到碎葉紫堇堿轉(zhuǎn)化為去氫碎葉紫堇堿、四氫巴馬汀轉(zhuǎn)化為巴馬汀的現(xiàn)象，預(yù)示巖黃連藥材中的脫氫酶對(duì)卡維汀具有專一的底物特異性。
　　 2.高速逆流色譜法分離制備巖黃連中化學(xué)成分。
　　 針對(duì)巖黃連干燥過(guò)程的動(dòng)態(tài)分析的結(jié)果，由于缺乏標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照，難以解釋巖黃連中的某些成分在干燥過(guò)程中發(fā)生變化的原因，因此采用高速逆流色譜法對(duì)巖黃連中的化學(xué)成分進(jìn)行了分離制備研究。
　　 對(duì)于巖黃連正丁醇萃

6、取物，采用本研究建立的溶劑系統(tǒng)，經(jīng)過(guò)1次HSCCC分離，即可得到dehydrocavidine、dehydrocheilanthifoline、dehydroapocavidine或cavidine、或pallidine等五種生物堿成分(純度均大于95％)。
　　 對(duì)于巖黃連水層留余物，由于水層留余物極性大，只在水中有較好的溶解性，且難溶解于甲醇或乙醇，故不能使用傳統(tǒng)的兩相溶劑系統(tǒng)法進(jìn)行HSCCC分離。本論文采用雙含水溶劑分別為

7、固定相與流動(dòng)相，利用pH梯度以及醇濃度梯度法對(duì)其進(jìn)行了HSCCC分離，得到了一個(gè)極性較大的未知化合物(純度大于99％)。
　　 對(duì)巖黃連石油醚萃取物進(jìn)行HSCCC分離研究，得到了一個(gè)極性較低的未知化合物(純度大于90％)。
　　 3.巖黃連生物堿體外清除自由基活性評(píng)價(jià)。
　　 采用經(jīng)典的體外DPPH清除模型，評(píng)價(jià)了巖黃連7個(gè)提取物部位和10個(gè)生物堿成分清除自由基的活性。結(jié)果表明巖黃連各生物堿成分及各提取物部位的D