聲動力學(xué)療法對S180腹水瘤細(xì)胞幾種核內(nèi)蛋白表達(dá)及酶活性影響的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)基于聲動力學(xué)療法對腫瘤細(xì)胞的增殖活性存在兩種抑制作用模式(直接殺傷和誘導(dǎo)凋亡)的研究基礎(chǔ)之上，采用頻率為1.34MHz，強(qiáng)度為3W/cm2高頻聚焦超聲激活血卟啉處理S180腹水型腫瘤細(xì)胞，在處理后的不同時(shí)間段取材，并通過免疫細(xì)胞化學(xué)等方法檢測在超聲激活血卟啉的殺傷和誘導(dǎo)凋亡的協(xié)同作用下，與腫瘤細(xì)胞增殖活性、凋亡調(diào)節(jié)、基因復(fù)制能力、轉(zhuǎn)錄活性、蛋白質(zhì)合成等密切相關(guān)的幾種核內(nèi)蛋白質(zhì)和關(guān)鍵酶的表達(dá)隨取材時(shí)間的動態(tài)變化，利用專業(yè)圖像分析軟件

2、和統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對它們表達(dá)的變化進(jìn)行分析處理，得到差異顯著性分析結(jié)果并給予生物學(xué)意義上的合理解釋。不同的檢測指標(biāo)的變化也間接的反映了聲動力學(xué)療法對腫瘤細(xì)胞核內(nèi)基因表達(dá)活動的影響?？傊緦?shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步為聲動學(xué)療法抑癌機(jī)制的闡明，積累科學(xué)的數(shù)據(jù)和有益的資料。通過實(shí)驗(yàn)得到如下結(jié)果： 1.分子生物學(xué)研究表明，核仁組成區(qū)嗜銀蛋白是與具有轉(zhuǎn)錄活性rRNA基因相結(jié)合的一類高度磷酸化的酸性非組蛋白，該蛋白表達(dá)量的強(qiáng)弱和形態(tài)學(xué)的變化可以間接反映細(xì)胞

3、內(nèi)rDNA轉(zhuǎn)錄活性的水平、以及核仁組成區(qū)結(jié)構(gòu)和功能的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SDT療法對嗜銀蛋白表達(dá)有明顯的抑制作用，使腫瘤細(xì)胞的增殖活性受到顯著的抑制。 2.增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，是真核生物細(xì)胞DNA合成所必需的核蛋白，其合成和表達(dá)與細(xì)胞的增殖狀態(tài)有關(guān)。此外，該蛋白還在DNA修復(fù)過程中起到重要的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SDT療法對腫瘤細(xì)胞的增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的具有顯著抑制作用，可直接影響到腫瘤細(xì)胞核內(nèi)D

4、NA的合成、復(fù)制、修復(fù)過程，從而進(jìn)一步抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖活性。 3.突變型p53蛋白不僅喪失了野生型p53蛋白對細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程的負(fù)調(diào)控能力以及抑制細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，而且還干擾了野生型p53亞基的正常功能，并獲得細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力，具有癌蛋白的生物功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SDT療法對S180腹水型腫瘤細(xì)胞中突變型p53蛋白的表達(dá)有明顯的抑制作用，進(jìn)而使其促癌功能的發(fā)揮受到了抑制。 4.在多種人類細(xì)胞中都發(fā)現(xiàn)

5、有c-myc的高度表達(dá)，它能促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞分化。近年研究表明，c-myc還參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控.c-myc是調(diào)控細(xì)胞的周期的主要基因，能調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和死亡兩個截然相反的過程。信號傳遞系統(tǒng)激活后，如果培養(yǎng)體系中有足夠的生長因子持續(xù)作用，則細(xì)胞增殖并分裂；否則便通過細(xì)胞凋亡機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SDT療法可使S180腹水型腫瘤細(xì)胞中c-myc蛋白的表達(dá)受到抑制，其表達(dá)量的變化可能會進(jìn)一步誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。 5

6、.c-jun和c-fos是一類與腫瘤細(xì)胞多種癌基因轉(zhuǎn)錄活動密切相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子，c-fos、c-jun在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá)，二者通過亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)結(jié)合形成同源或異源二聚體，構(gòu)成轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白AP-1，作用于靶基因調(diào)控序列中的AP-1結(jié)合位點(diǎn)，調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，對細(xì)胞的增殖和分化起重要的調(diào)控作用。研究結(jié)果表明：SDT療法對二者的表達(dá)有明顯的抑制作用，表達(dá)量的下降可導(dǎo)致其對相關(guān)癌基因的轉(zhuǎn)錄活動的調(diào)節(jié)作用受到嚴(yán)重影響，從而影響到癌細(xì)胞旺盛的

7、增殖活動。 6.端粒作為細(xì)胞生長有絲分裂的時(shí)鐘，在細(xì)胞生長、衰老、凋亡中起著重要的作用，而端粒酶是一種反轉(zhuǎn)錄酶對于維持和平衡細(xì)胞中端粒的長度，修復(fù)斷裂的染色體末端，起著非常重要的作用。多數(shù)腫瘤細(xì)胞中端粒酶活性較高，因此腫瘤細(xì)胞獲得了較強(qiáng)的增殖能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SDT療法使端粒酶活性受到顯著抑制，使受損的癌細(xì)胞的染色體無法進(jìn)行有效的修復(fù)，加快了其死亡的進(jìn)程。 7.DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ是一類具有調(diào)節(jié)DNA三維結(jié)構(gòu)的核酶，它直