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文檔簡介
1、目的:腫瘤是威脅人類健康的重大疾??;中藥復方因具有多途徑、多靶點、毒副作用小等優(yōu)勢,在腫瘤治療和輔助治療方面已成為新的研究熱點。腫瘤組織中巨噬細胞(Macrophage,Mψ)浸潤和抗瘤相關分子及凋亡相關基因的表達,與腫瘤的生長密切相關;了解中藥對之影響,是研究中藥抗腫瘤機制的重要方面。中藥復方抑瘤飲(以下簡稱“抑瘤飲”簡寫為“YLY”)是在中醫(yī)抗腫瘤理論指導下組成的方劑,其主要成分為:黃芪、黨參、云芝、三七、仙鶴草、墨旱蓮、雞血藤、卷
2、柏、大棗、陳皮等;臨床應用和預實驗顯示其體內確有抗腫瘤效果。為揭示其體內抗腫瘤的機制,本研究以小鼠荷S180腫瘤后每日灌服抑瘤飲,于不同時間點取瘤制切片行免疫組化染色,動態(tài)觀察對腫瘤組織中Mψ浸潤及腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、誘導型一氧化氮合酶(Induciblenitricoxidesynthase,iNOS)、Bcl-2和Bax表達的影響;以明確抑瘤飲體內抗腫瘤效應是否與之有關。
3、 方法:給BALB/c小鼠右腋皮下接種濃度為1×107/mL的S180細胞,0.2mL/只。其中,抑瘤飲組于荷瘤24h后開始灌服抑瘤飲,2次/日,0.5mL/次;荷瘤對照組(以下簡稱“對照組”簡寫為“control”)同時灌服涼開水,2次/日,0.5mL/次。每日觀察小鼠和腫瘤生長情況。在灌胃10天、20天、30天、40天時殺鼠稱取體重,取瘤稱取瘤重。取腫瘤制成石蠟切片:HE染色,常規(guī)病理觀察;免疫組化法檢測腫瘤組織中Mψ的浸潤及TN
4、F-α、iNOS、Bcl-2和Bax的表達,并以圖像分析系統進行分析。圖像分析,以陽性酶點(Positiveenzymedot,PED)表示陽性染色范圍大??;以灰度值(Greyscale,GS)表示陽性染色強度,取值范圍為0~255,其數值越大表示陽性染色越弱,其數值越小表示陽性染色越強。 結果:1抑瘤飲對小鼠S180移植腫瘤生長的動態(tài)影響 對照組小鼠接種腫瘤細胞后,第4、5日可觸及腫瘤;5~10日腫瘤生長速度最快;10
5、日后腫瘤生長速度有所下降;20日后又漸上升。與對照組相比,抑瘤飲組小鼠腫瘤生長速度,前5天雖稍顯低,但無統計學意義(P>0.05);5天后直至20天,降低即有顯著意義(P<0.05);20天后降低更為顯著(P<0.01)。 抑瘤飲組于第10、20、30、40天時間點:抑瘤率分別為21.89%±3.49%、28.77%±5.12%、48.65%±4.53%和59.74%±5.71%;瘤指數分別為5.09±0.93、6.00±0.7
6、3、6.58±1.49和11.61±6.07。對照組瘤指數在相應時間點分別為6.42±0.55、7.63±1.49、10.34±3.65和20.50±7.81,均明顯高于抑瘤飲組(P<0.05),且兩組差異逐漸增大。 2腫瘤組織HE染色顯微鏡觀察 自20天后,抑瘤飲組與對照組相比,間質增多,腫瘤細胞排列稀疏,核分裂象少,壞死和凋亡多。各時間點抑瘤飲組腫瘤組織中淋巴細胞和Mψ浸潤均多于對照組。 3腫瘤組織免疫組化染
7、色 3.1抑瘤飲對腫瘤組織中Mψ浸潤的動態(tài)影響3.1.1Mψ-GS:10天、20天、30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為159.72±15.44、162.21±14.45、165.10±11.45、162.39±14.94)與對照組(分別為157.51±12.66、168.12±11.75、165.43±7.21、166.48±17.52)相比,均無顯著差異(均P>0.05)。動態(tài)分析:兩組組內各時間點間均無顯著差異。
8、3.1.2Mψ-PED:10天、20天、30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為952.23±79.52、888.03±100.24、654.40±55.09、561.09±55.42)與對照組(分別為528.60±47.96、382.31±37.83、290.34±57.14、94.37±18.68)相比,均顯著升高(均P<0.01)。動態(tài)分析:對照組呈下降趨勢;抑瘤飲組也呈下降趨勢,但仍高于對照組。 3.2抑瘤飲對腫瘤組織中抗瘤
9、相關分子表達的動態(tài)影響 3.2.1TNF-α: 3.2.1.1TNF-α-GS:10天點時,抑瘤飲組(157.58±5.26)與對照組(158.30±5.77)相比,無顯著差異(P>0.05);20天、30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為147.19±7.80、161.56±5.63、162.32±5.67)與對照組(分別為167.89±6.85、176.37±9.08、175.97±5.88)相比,均顯著降低(均P<0
10、.01)。動態(tài)分析:對照組呈逐漸上升趨勢;抑瘤飲組10天、30天、40天點間無顯著差異,而20天點時低。 3.2.1.2TNF-α-PED:10天點時,抑瘤飲組(1304.60±120.83)與對照組(1193.94±145.99)相比,無顯著差異(P>0.05);20天、30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為1130.49±132.71、972.51±109.52、836.74±91.57)與對照組(分別為403.60±66.7
11、6、126.03±25.03、79.26±15.44)相比,均顯著升高(均P<0.01)。動態(tài)分析:對照組呈下降趨勢;抑瘤飲組也呈下降趨勢,但仍高于對照組。 3.2.2iNOS:3.2.2.1iNOS-GS:10天點時,抑瘤飲組(163.66±8.14)與對照組(160.33±7.16)相比,無顯著差異(P>0.05);20天、30天點時,抑瘤飲組(分別為150.58±8.42、150.94±4.52)與對照組(分別為159.3
12、4±5.86、161.94±12.31)相比,均顯著降低(均P<0.05);40天點時,抑瘤飲組(150.12±4.00)與對照組(163.57±5.95)相比,降低極顯著(P<0.01)。動態(tài)分析:對照組各時間點間無顯著差異;抑瘤飲組20天、30天、40天點間無顯著差異,但均低于10天點。 3.2.2.2iNOS-PED:10天點時,抑瘤飲組(287.00±75.25)與對照組(245.77±72.62)相比,無顯著差異(P>
13、0.05);20天30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為762.57±136.13、1024.83±227.79、1121.43±164.85)與對照組(分別為439.23±85.55、377.29±86.55、346.41±46.11)相比,均顯著升高(均P<0.01)。動態(tài)分析:對照組在20天點達到最大值后開始下降;抑瘤飲組呈升高趨勢。 3.3抑瘤飲對腫瘤組織中凋亡相關基因表達的動態(tài)影響 3.3.1Bcl-2:
14、 3.3.1.1Bcl-2-GS:10天、20天、30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為160.27±18.57、157.75±14.70、159.04±10.57、156.76±18.72)與對照組(分別為154.94±9.82、155.93±7.85、158.83±8.84、158.76±10.49)相比,均無顯著差異(均P>0.05)。動態(tài)分析:兩組組內均無顯著差異。 3.3.1.2Bcl-2-PED:10天、20天、30天
15、、40天點時,抑瘤飲組(分別為1911.26±301.38、1917.49±201.81、1749.11±308.47、1228.89±173.33)與對照組(分別為2509.77±254.65、2503.57±210.06、2395.40±273.34、2368.86±267.86)相比,均顯著降低(均P<0.01)。動態(tài)分析:對照組各時間點間無顯著差異;抑瘤飲組呈下降趨勢。 3.3.2Bax: 3.3.2.1Bax-
16、GS:10天點時,抑瘤飲組(173.31±8.29)與對照組(177.22±11.68)相比,無顯著差異(P>0.05);20天點時,抑瘤飲組(157.35±8.88)與對照組(179.76±19.70)相比,顯著降低(P<0.05);30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為141.78±17.58、151.59±15.24)與對照組(分別為170.69±16.01、181.93±13.52)相比,降低極顯著(均P<0.01)。動態(tài)分析:對
17、照組各時間點間無顯著差異;抑瘤飲組呈下降趨勢。 3.3.2.2Bax-PED:10天、20天、30天、40天點時,抑瘤飲組(分別為1105.17±189.54、1229.74±156.55、1349.17±228.04、1583.17±241.94)與對照組(分別為229.23±37.81、273.34±41.83、267.03±35.40、255.74±28.28)相比,均顯著升高(均P<0.01)。動態(tài)分析:對照組各時間點間
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