上皮來源腫瘤中TGF-β和EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相互作用關(guān)系研究.pdf

1、表皮生長因子受體(EGFR)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和轉(zhuǎn)化生長因子p(TGF-β)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素。上皮來源的惡性腫瘤中常伴隨有EGFR的過表達(dá)。轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)是一種多功能多膚類生長因子，TGF-β及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起重要的調(diào)節(jié)作用，我們在研究以EGFR為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)EGFR活性被抑制后，試驗(yàn)動物的肺部出現(xiàn)了不同程度的纖維化，而TGF-β正是介導(dǎo)多種器官纖維化的重要介質(zhì)，由此提示我們，在

2、上皮來源的腫瘤中這兩種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能存在著一定的作用關(guān)系。 TGF-β1蛋白對上皮來源的腫瘤細(xì)胞具有生長抑制作用:當(dāng)在培養(yǎng)的人肺腺癌細(xì)胞A549中加入TGF-β1蛋白時(shí)，A549的增殖受到了明顯的抑制，且出現(xiàn)了形態(tài)學(xué)上的變化，其外觀更類似于成纖維細(xì)胞。TGF-β1蛋白對上皮來源的腫瘤細(xì)胞中EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有抑制作用，當(dāng)給予人表皮癌細(xì)胞 A431和人卵巢癌細(xì)胞SKOV3以TGF-β1蛋白刺激時(shí)，EGFR信號通路相關(guān)蛋白EGFR,

3、ERK和AKT出現(xiàn)了不同程度的表達(dá)抑制。TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游Smad2/3蛋白與ERK蛋白具有直接的作用關(guān)系，我們通過免疫沉淀法觀察到了A431細(xì)胞中Smad2/3和ERK蛋白一起沉淀下來，并且當(dāng)在A431細(xì)胞給予TGF-β蛋白刺激時(shí)，隨Smad2/3沉淀的ERK蛋白量增多。以上結(jié)果表明，在上皮來源的腫瘤中EGFR和TGF-β信號傳導(dǎo)通路存在著相互制約的作用關(guān)系，TGF-β配體蛋白能抑制EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的功能，并且TGF-β下

4、游信號蛋白Smad2/3能與ERK蛋白直接作用，提示EGFR和TGF-β信號傳導(dǎo)通路的相互制約關(guān)系可能在于Smad2/3與ERK蛋白的直接作用。 TGF-β對于腫瘤的作用也可以歸納為由多種細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤微環(huán)境對腫瘤生長的影響，是一種多因素多條件的復(fù)雜作用，成纖維細(xì)胞是這些調(diào)控因子中的關(guān)鍵因素。我們采用同組織來源的腫瘤細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的共培養(yǎng)模型來觀察不同培養(yǎng)比例條件下對腫瘤細(xì)胞生長的影響以及在共培養(yǎng)條件下EGFR和TGF-β信號傳導(dǎo)

5、通路的作用關(guān)系。研究表明，在體外共培養(yǎng)條件下當(dāng)人肺腺癌細(xì)胞A549和人胚肺成纖維細(xì)胞HELF以2:3的比例混合時(shí)，共培養(yǎng)體系總體細(xì)胞的生長、腫瘤細(xì)胞集落形成能力都受到了最大程度的抑制，在此條件下，細(xì)胞培養(yǎng)液中TGF-β1蛋白的含量最高，并且由間接免疫熒光試驗(yàn)表明此條件下的EGFR的活性也相對較低，提示這種抑制作用可能來源于EGFR和TGF-β信號傳導(dǎo)通路的拮抗關(guān)系。在體內(nèi)共培養(yǎng)條件下，隨著共同與小鼠Lewis肺癌細(xì)胞接種的小鼠上皮成纖維

6、細(xì)胞的增加，Lewis肺癌荷瘤率降低，并且瘤重受到了一定程度的抑制;免疫組化試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著共同接種的小鼠上皮成纖維細(xì)胞的增加，腫瘤組織中TGF-β1表達(dá)量增加，EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白表達(dá)有一定程度的降低，以上結(jié)果提示，體內(nèi)共培養(yǎng)模型的抑制作用也可能來源于EGFR和TGF-β信號傳導(dǎo)通路的拮抗關(guān)系。綜上所述上皮來源的腫瘤中存在著EGFR和TGF-β信號傳導(dǎo)通路的拮抗關(guān)系，TGF-β信號可能通過其配體，下游Smad2l3蛋白產(chǎn)生對