TGF-β-Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵基因在賁門腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)理研究.pdf

1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）家族通過TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。TGF-β/Smads通路中任一元件的異常都可導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的紊亂，影響TGF-β的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)，尤其是失去了對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，但是針對(duì)不同的腫瘤類型，TGF-β/Smads通路中關(guān)鍵基因的缺失及失活機(jī)制不同。流行病學(xué)調(diào)查顯示，20世紀(jì)8

2、0年代以來，賁門癌(gastric cardia adenocarcinoma，GCA)的發(fā)病呈不斷上升趨勢(shì)，但迄今為止，賁門癌發(fā)生的分子機(jī)制并不十分明確。因此，深入研究此信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵基因在賁門腺癌中的作用將會(huì)為揭示賁門腺癌的發(fā)病機(jī)制提供分子生物學(xué)依據(jù)。
　　 本研究首先從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測(cè)了賁門腺癌組織中TGF-β1、TGF-β受體1和受體2(TGF-β receptor typeⅠ和typeⅡ，TGFBR1和TGF

3、BR2)、Smad2、Smad3、Smad4和Smad7的表達(dá)及其與各臨床指標(biāo)及生物學(xué)行為的關(guān)系；其次，從遺傳學(xué)的角度入手，檢測(cè)了TGF-β1基因啟動(dòng)子區(qū)C-509T、G-800A、C-988A和外顯子區(qū)T869C、G915C和C788T位點(diǎn)，TGFBR1 Int7G24A和*6A位點(diǎn)及TGFBR2 G-875A位點(diǎn)在賁門腺癌和健康人群中的頻率分布，探討這些SNP（single nucleotide polymorphisms）位點(diǎn)與賁

4、門腺癌易感性的關(guān)系；然后，檢測(cè)了賁門腺癌及上皮內(nèi)瘤變組織中TGFBR1、TGFBR2和Smad4基因CpG島的甲基化狀態(tài)，并進(jìn)一步分析了甲基化與基因mRNA和蛋白表達(dá)水平之間的關(guān)聯(lián)性。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　 第一部分：TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵基因在賁門腺癌組織中的表達(dá)
　　 目的：研究賁門腺癌中TGF-β/Smads信號(hào)通路關(guān)鍵基因TGF-β1及其受體（TGFBR1和TGFBR2）、Smads基因包

5、括受體調(diào)節(jié)型Smads(Smad2和Smad3)、通用調(diào)節(jié)型Smad4和抑制型Smad(Smad7)在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平上的改變，明確此通路中各關(guān)鍵基因在賁門腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 方法：應(yīng)用半定量RT-PCR(reverse transcription polymerase chainreaction)的方法檢測(cè)賁門腺癌中TGF-β1、TGFBR1、TGFBR2、Smad2、Smad3、Smad4和Smad7的mRNA表達(dá)，

6、采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)賁門腺癌中TGF-β1、TGFBR1、TGFBR2、p-Smad2/3、Smad4及Smad7的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.GCA組織中TGF-β1的mRNA表達(dá)水平顯著高于相應(yīng)的正常組織（0.8494±0.3024vs.0.3879±0.1754，P＜0.01），其蛋白表達(dá)水平亦顯著高于相應(yīng)的正常組織(P＜0.01)。且Ⅲ、Ⅳ期GCA患者的TGF-β1 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于Ⅰ、

7、Ⅱ期患者，隨腫瘤組織分化程度的降低，TGF-β1在GCA組織中的mRNA和蛋白表達(dá)水平逐漸升高(P＜0.05)。
　　 2.GCA組織中TGFBR1的mRNA表達(dá)水平顯著低于相應(yīng)的正常組織（0.4015±0.1758vs．0.9064±0.2925，P＜0.01），其蛋白表達(dá)水平亦顯著低于正常組織(P＜0.01)。Ⅲ、Ⅳ期GCA患者TGFBR1的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著低于Ⅰ、Ⅱ期患者(P＜0.05)。
　　 3.GC

8、A組織中TGFBR2的mRNA表達(dá)水平顯著低于相應(yīng)的正常組織（0.3879±0.1205vs．0.8917±0.2765，P＜0.01），其蛋白表達(dá)水平亦顯著低于正常組織(P＜0.01)。Ⅲ、Ⅳ期GCA患者TGFBR2的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著低于Ⅰ、Ⅱ期患者(P＜0.05)，隨著腫瘤組織分化程度的降低，TGFBR2蛋白陽性表達(dá)率逐漸降低(P＜0.05)。
　　 4.GCA組織中Smad2和Smad3的mRNA表達(dá)水平顯著低于

9、相應(yīng)的正常組織(0.4956±0.1862vs.0.8611±0.2914和0.4713±0.1712vs．0.8314±0.2811，P＜0.01)。GCA組織p-Smad2/3的蛋白表達(dá)陽性率為42.7％，顯著低于相應(yīng)正常組織的蛋白表達(dá)(93.6％)(P＜0.01)。Ⅲ、Ⅳ期GCA患者p-Smad2/3蛋白表達(dá)水平顯著低于Ⅰ、Ⅱ期患者，隨腫瘤組織分化程度的降低，p-Smad2/3蛋白陽性表達(dá)率逐漸降低(P＜0.05)。
　　

10、 5.GCA組織中Smad4的mRNA表達(dá)水平顯著低于相應(yīng)的正常組織（0.5145±0.1987vs.0.8954±0.2856，P＜0.01），其蛋白表達(dá)水平亦顯著低于正常組織(P＜0.01)。Ⅲ、Ⅳ期GCA患者Smad4基因蛋白表達(dá)水平顯著低于Ⅰ、Ⅱ期患者，且隨腫瘤組織分化程度的降低，Smad4蛋白陽性表達(dá)率逐漸降低(P＜0.05)。
　　 6.GCA組織中Smad7的mRNA表達(dá)水平顯著高于相應(yīng)的正常組織(0.5114±0

11、.1962vs．0.2012±0.1006，P＜0.01)，其蛋白表達(dá)水平亦顯著高于相應(yīng)的正常組織(P＜0.01)。隨腫瘤組織分化程度的降低，Smad7蛋白陽性表達(dá)率逐漸增高(P＜0.05)。
　　 7.GCA中TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路多個(gè)基因蛋白表達(dá)的聯(lián)合分析顯示，TGFBR1和TGFBR2之間、p-Smad2/3和Smad4之間、TGF-β1和Smad7之間、TGFBR1和p-Smad2/3之間呈正相關(guān)，（r分別為0

12、.74、0.84、0.24和0.38，P值均＜0.05）；TGF-β1和TGFBR1之間、TGF-β1和p-Smad2/3之間、TGFBR1和Smad7之間呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.54、-0.49和-0.22，P值均＜0.05）；p-Smad2/3和Smad7之間無明顯的相關(guān)性（r=-0.09，P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.GCA組織中TGF-β1和Smad7的過表達(dá)可能與GCA的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　

13、　 2.GCA組織中TGFBR1、TGFBR2、Smad2、Smad3(p-Smad2/3)和Smad4的低表達(dá)可能與GCA的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 3.聯(lián)合分析顯示，GCA中TGFBR1和TGFBR2、p-Smad2/3和Smad4、TGF-β1和Smad7、TGFBR1和p-Smad2/3之間的蛋白表達(dá)呈明顯的正相關(guān)，TGF-β1和TGFBR1、TGF-β1和p-Smad2/3、TGFBR1和Smad7之間呈負(fù)相關(guān)，p-Sm

14、ad2/3和Smad7之間無明顯的相關(guān)性。提示TGF-β受體、R-Smad和Smad4基因任何一種發(fā)生改變，均可使腫瘤細(xì)胞失去對(duì)TGF-β1的敏感性而發(fā)生不受控的異常增殖。
　　 第二部分：TGF-β1及其受體1和受體2基因多態(tài)性與賁門腺癌易感性
　　 目的：通過病例對(duì)照研究探討TGF-β1基因C-509T、G-800A、C-988A、T869C、G915C和C788T，TGFBR1基因Int7G24A和*6A以及TGF

15、BR2基因G-875A等SNP位點(diǎn)與賁門腺癌遺傳易感性的關(guān)系。
　　 方法：分別應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerasechain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)、聚合酶鏈反應(yīng)-引物引入限制性內(nèi)切酶分析(polymerase chain reaction-primer introduced restriction anal

16、ysis，PCR-PIRA)、聚合酶鏈反應(yīng)-擴(kuò)增阻滯突變技術(shù)（polymerase chain reaction-amplification refractory mutation system， PCR-ARMS)、PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度分析等方法進(jìn)行基因分型，采用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)方法檢測(cè)賁門腺癌患者及健康對(duì)照的TGF-β1血漿水平，采用TUNEL與免疫組化雙標(biāo)方法檢測(cè)賁門腺癌組

17、織中腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.GCA組中UGIC家族史陽性個(gè)體比例為36.8％，顯著高于健康對(duì)照組的5.1％，表明UGIC家族史可能增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(校正后的OR=10.61，95％CI=7.64-12.28)。
　　 2.GCA組TGF-β1基因-509T等位基因型頻率(52.4％)顯著高于健康對(duì)照組(44.0％)(P＜0.01)，與CC基因型相比，攜帶CT或TT基因型可顯著增加

18、GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(校正后OR分別為1.67和1.89，95％CI分別為1.17-2.45和1.25-2.71)。分層分析發(fā)現(xiàn)：與CC基因型相比，攜帶CT或TT基因型可顯著增加非吸煙人群患GCA（校正后OR分別為1.97和2.33，95％CI分別為1.28-2.87和1.61-3.01）、家族史陰性人群患GCA（校正后OR分別為1.76和1.97，95％CI分別為1.25-2.67和1.10-2.89）及Ⅲ、Ⅳ期GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（校正后O

19、R分別為1.94和2.35，95％CI分別為1.40-2.57和1.67-2.89）。
　　 3.GCA組TGF-β1基因869C等位基因型頻率(53.3％)顯著高于健康對(duì)照組(45.5％)(P＜0.01)，與TT基因型相比，攜帶TC或CC基因型可顯著增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（校正后的OR分別為1.65和1.85，95％CI分別為1.15-2.41和1.21-2.69）。分層分析發(fā)現(xiàn)：與TT基因型相比，攜帶TC或CC基因型可顯著增加

20、非吸煙人群患GCA（校正后OR分別為1.98和2.07，95％CI分別為1.31-2.89和1.45-2.91）、家族史陰性人群患GCA（校正OR=1.72和1.87，95％CI=1.23-2.61和1.19-2.78）及Ⅲ期和Ⅳ期GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（校正后OR=1.90和2.07，95％CI=1.47-2.56和1.54-2.69）。
　　 4.TGF-β1基因G-800A、C-988A、G915C和C788T多態(tài)性位點(diǎn)的突變等

21、位基因型均較低，它們的基因型及等位基因型頻率在GCA組和健康對(duì)照組之間，其分布均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 5.TGF-β1基因C-509T和T869C兩個(gè)位點(diǎn)處于強(qiáng)連鎖不平衡狀態(tài)(D'=0.94)。單體型分布顯示，與-509C/869T相比，-509T/869C單體型可顯著增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（校正OR=1.92，95％CI=1.38-2.59）。
　　 6.功能分析顯示：攜帶TGF-β1基因C-509T位點(diǎn)

22、CC基因型的GCA患者 TGF-β1水平及蛋白表達(dá)陽性率均明顯低于攜帶TT或CT+TT基因型的GCA患者，攜帶TGF-β1基因T869C位點(diǎn)TT基因型的GCA患者TGF-β1水平及蛋白表達(dá)陽性率均明顯低于攜帶CC或TC+TT基因型的GCA患者。與攜帶TGF-β1-509TT和869CC基因型的GCA患者相比（29.8±1.8％），攜帶-509CC和869TT基因型的GCA患者其凋亡腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞率顯著降低(17.3％±1.7％，P＜0

23、.05)，而雜合型基因攜帶者無明顯差異(25.4±1.5％，P＞0.05)。
　　 7.GCA組TGFBR1基因Int7G24A多態(tài)性位點(diǎn)的A等位基因攜帶者患GCA的風(fēng)險(xiǎn)是G等位基因的1.34倍（校正后的OR=1.34，95％CI為1.03-1.87）。與GG基因型相比，攜帶GA和AA基因型可顯著增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（校正后的OR為1.34，95％CI為1.02-1.73）。與GG基因型相比，Ⅲ期和Ⅳ期GCA中攜帶GA和AA基因

24、型可顯著增加發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(校正OR=1.41，95％CI=1.05-1.98)。TGFBR1基因*6A多態(tài)性位點(diǎn)的基因型及等位基因型頻率在GCA組和對(duì)照組之間，其分布均無顯著性差異(P＞0.05)。Int7G24A和*6A兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的基因型與TGFBR1在GCA中的表達(dá)沒有明顯的相關(guān)性。
　　 8.與TGFBR2基因G-875A位點(diǎn)的G等位基因相比，攜帶A等位基因可使GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低約30％（校正后的OR=0.73，95％C

25、I為0.49-0.92）。與GG基因型相比，攜帶GA和AA基因型可顯著降低GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（校正后的OR為0.71，95％CI為0.52-0.95）。與GG基因型相比，Ⅲ期和Ⅳ期GCA患者中攜帶GA和AA基因型可顯著降低GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(校正OR=0.70，95％CI=0.47-0.92)。G-875A基因型與TGFBR2在GCA中的表達(dá)沒有明顯的相關(guān)性。
　　 9.與保護(hù)性基因型組合-509CC-Int7GG--875AA相比

26、，僅一個(gè)位點(diǎn)攜帶易感基因（雜合子或純合子）的個(gè)體患GCA的風(fēng)險(xiǎn)升高1.31倍（校正OR=1.31，95％CI=1.02-1.58），當(dāng)兩個(gè)位點(diǎn)同時(shí)存在易感等位基因時(shí)，個(gè)體患GCA的風(fēng)險(xiǎn)升高1.54倍（校正OR=1.54，95％CI=1.21-1.85），而當(dāng)三個(gè)位點(diǎn)同時(shí)存在易感等位基因時(shí)可使GCA的風(fēng)險(xiǎn)升高2.05倍(校正OR=2.05，95％CI=1.52-2.61)。趨勢(shì)性檢驗(yàn)顯示，攜帶易感等位基因位點(diǎn)的個(gè)數(shù)越多，GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)越

27、高(x2趨勢(shì)=21.843，P趨勢(shì)＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.上消化道腫瘤家族史明顯增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　 2.與TGF-β1-509CC基因型相比，攜帶CT或TT基因型可顯著增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，與TGF-β1869TT基因型相比，攜帶TC或CC基因型可顯著增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并且在Ⅲ、Ⅳ期GCA患者中此作用更加明顯。攜帶-509CC或869TT基因型的GCA患者其TGF-β1水平、蛋白表達(dá)

28、及凋亡腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞率均顯著降低。TGF-β1C-509T和T869C兩個(gè)位點(diǎn)處于強(qiáng)連鎖不平衡，與-509C/869T相比，-509T/869C單體型可顯著增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　 3.TGF-β1基因G-800A、C-988A、G915C和C788T多態(tài)性位點(diǎn)與GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。
　　 4.與TGFBR1基因Int7G24A多態(tài)性位點(diǎn)的GG基因型相比，攜帶GA和AA基因型可顯著增加GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并且在Ⅲ、

29、Ⅳ期GCA患者中此作用更加明顯。TGFBR1基因*6A多態(tài)性位點(diǎn)與GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。Int7G24A和*6A多態(tài)性位點(diǎn)與TGFBR1的蛋白表達(dá)無明顯相關(guān)。
　　 5.與TGFBR2基因G-875A多態(tài)性位點(diǎn)的GG基因型相比，攜帶GA和AA基因型可顯著降低GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。但此位點(diǎn)與TGFBR2的蛋白表達(dá)無明顯相關(guān)。
　　 6.與保護(hù)性基因型組合-509CC-Int7GG--875AA相比，攜帶易感等位基因位點(diǎn)的個(gè)數(shù)越

30、多，GCA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)越高。
　　 第三部分：賁門腺癌中TGF-β受體1、受體2及Smad4基因甲基化狀態(tài)分析
　　 目的：探討賁門腺癌中TGFBR1、TGFBR2和Smad4基因的甲基化狀態(tài)及其與mRNA和蛋白表達(dá)的相關(guān)性，為確定此三種基因甲基化在賁門腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供理論依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法(methylation specific polymerase chain re

31、action，MSP)檢測(cè)賁門腺癌及上皮內(nèi)瘤變組織中TGFBR1、TGFBR2及Smad4的甲基化狀態(tài)，并分析其與各臨床指標(biāo)及生物學(xué)行為的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.TGFBR1基因在正常組織、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及GCA組織中的甲基化率分別為1.8％(2/110)、3.8％(1/26)、11.4％(4/35)和30.9％(34/110)。高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及GCA組織中TGFBR1基因發(fā)生甲基化的比率顯

32、著高于正常組織(P＜0.05)。Ⅲ期和Ⅳ期GCA患者癌組織中TGFBR1基因發(fā)生甲基化的比率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P＜0.05)。
　　 2.TGFBR1基因甲基化陽性的GCA組織其mRNA表達(dá)顯著低于未發(fā)生甲基化的GCA組織（0.1816±0.0816vs.0.6514±0.2187，P＜0.01）。發(fā)生TGFBR1高甲基化的腫瘤組織蛋白表達(dá)均為陰性，TGFBR1基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化與其蛋白表達(dá)缺失之間有明顯的相關(guān)性(P＜0

33、.01)。
　　 3.TGFBR2基因-25和-140位點(diǎn)的甲基化率在正常組織、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及GCA組織中相同，分別為3.6％(4/110)、7.7％(2/26)、25.7％(9/35)和47.3％(52/110)。高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及GCA組織中TGFBR2基因發(fā)生甲基化的比率顯著高于正常組織(P＜0.01)，Ⅲ期和Ⅳ期GCA患者中TGFBR2基因發(fā)生甲基化的比率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P＜0.05)，高、

34、中、低分化的腫瘤組織發(fā)生甲基化的比率亦有顯著性差異(P＜0.05)，分化程度越低，甲基化率越高。
　　 4.TGFBR2基因甲基化陽性的GCA組織其mRNA表達(dá)顯著低于未發(fā)生甲基化的GCA組織（0.1745±0.0756vs.0.5894±0.2061，P＜0.01）。發(fā)生TGFBR2高甲基化的52例腫瘤組織中有47例蛋白表達(dá)為陰性，TGFBR2基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化與其蛋白表達(dá)缺失有明顯的相關(guān)性(P＜0.01)。
　　

35、5.對(duì)于-248～26位點(diǎn)，GCA組織中Smad4的甲基化率為5.5％，而相應(yīng)正常粘膜及上皮內(nèi)瘤變組織均未檢測(cè)到甲基化，癌組織Smad4基因-248～26位點(diǎn)甲基化率顯著高于正常組織(P＜0.05)。對(duì)于30～171位點(diǎn)，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變和GCA組織Smad4的甲基化率分別為8.6％(3/35)和24.5％(27/110)，相應(yīng)正常粘膜及低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織均未檢測(cè)到甲基化。高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及癌組織Smad4基因30～171位點(diǎn)甲基化率

36、顯著高于正常組織(P＜0.05)。Ⅲ期和Ⅳ期GCA患者中Smad4基因此位點(diǎn)發(fā)生甲基化的比率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P＜0.05)，高、中、低分化腫瘤組發(fā)生甲基化的比例亦有明顯差異(P＜0.05)，分化程度越低，其甲基化率越高。
　　 6.對(duì)于-248～26位點(diǎn)，發(fā)生甲基化的GCA組織其Smad4基因mRNA和蛋白表達(dá)與未發(fā)生甲基化的GCA組織相比無顯著性差異；對(duì)于30～171位點(diǎn)，甲基化陽性的GCA組織其Smad4基因mRNA

37、表達(dá)顯著低于未發(fā)生甲基化的GCA組織（0.2987±0.0925vs．0.6415±0.2814，P＜0.01），且發(fā)生30～171區(qū)域高甲基化的27例GCA組織有24例Smad4蛋白表達(dá)為陰性，其甲基化與蛋白表達(dá)缺失之間有明顯的相關(guān)性(P＜0.01)。
　　 7.賁門腺癌中TGFBR1、TGFBR2及Smad4基因甲基化狀態(tài)的聯(lián)合分析顯示，隨著腫瘤分期的增高，至少一個(gè)基因發(fā)生甲基化、至少兩個(gè)基因同時(shí)發(fā)生甲基化及三個(gè)基因同時(shí)發(fā)生

38、甲基化的比率明顯增加（P值均＜0.05）。當(dāng)按病理分級(jí)進(jìn)行分析時(shí)，隨著腫瘤組織分化程度的降低，至少一個(gè)基因發(fā)生甲基化的比率呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。至少兩個(gè)基因同時(shí)發(fā)生甲基化及三個(gè)基因同時(shí)發(fā)生甲基化的比率則有明顯差異，隨著腫瘤組織分化程度的降低，甲基化率逐漸增加(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及GCA組織中TGFBR1基因發(fā)生甲基化的比率顯著高于正常組織，且TGFBR1在G

39、CA中的甲基化與腫瘤臨床分期有關(guān)，與組織分化無關(guān)。GCA中TGFBR1基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化與其mRNA和蛋白表達(dá)缺失之間有明顯的相關(guān)性。
　　 2.TGFBR2基因-25和-140位點(diǎn)的甲基化率在正常組織、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及GCA組織中相同，高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及癌組織中TGFBR2基因發(fā)生甲基化的比率顯著高于正常組織，且TGFBR2在GCA中的甲基化與腫瘤臨床分期和分化有關(guān)。GCA中TGFBR2基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基