補腎通脈方對伴胰島素抵抗的多囊卵巢綜合征大鼠胰島素信號轉(zhuǎn)導的影響.pdf

1、本研究分為四部分：
　　 第一部分：補腎通脈方對伴胰島素抵抗的多囊卵巢大鼠胰島素抵抗及排卵障礙的影響
　　 目的：皮下注射脫氫表雄酮(DHEA)聯(lián)合高脂高卡飲食喂養(yǎng)，建立一種新的胰島素抵抗(insulin resistance，IR)的多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)大鼠模型。并觀察補腎通脈方對PCOS大鼠的影響。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉

2、睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共20天，聯(lián)合高脂高熱卡飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機分為模型組和中藥組，另設13只正常組。中藥組大鼠以補腎通脈方干預。HE染色觀察各組大鼠卵巢形態(tài)學變化，葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖(FBG)，放射免疫法測定血清空腹胰島素(Fins)、睪酮(T)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)，計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)和LH/FSH。
　　 結(jié)果：與正常組

3、比較，模型組大鼠卵巢呈多囊樣改變，平均排卵數(shù)及排卵率、ISI、FSH明顯降低(P＜0.05，P<0.01)，F(xiàn)BG、Fins和T、E2、LH、LH/FSH濃度顯著升高(P＜0.05，P<0.01)。與模型組比較，中藥組大鼠卵巢卵泡內(nèi)顆粒細胞層數(shù)明顯增加，平均排卵數(shù)及排卵率、ISI、FSH均明顯增加(P＜0.01)，F(xiàn)ins、T和E2、LH/FSH顯著降低(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：皮下注射DHEA聯(lián)合高脂高卡飲食，可成功誘導

4、IR的PCOS大鼠模型。補腎通脈方可改善PCOS大鼠的胰島素抵抗及排卵障礙。
　　 第二部分：補腎通脈方對伴胰島素抵抗多囊卵巢綜合征大鼠胰島素受體表達的影響
　　 目的：觀察補腎通脈方對伴IR的PCOS大鼠胰島素靶器官中胰島素受體(insulin receptor，InsR)表達的影響，探討補腎通脈方改善伴IR的PCOS的機制。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共

5、20天，聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機分為模型組和中藥組，另設13只正常組。中藥組大鼠以補腎通脈方干預。各組大鼠于動情后期，在門靜脈推注胰島素前后各處死一半。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測各組大鼠肝臟、脂肪、骨骼肌組織InsR mRNA表達，免疫組化檢測卵巢組織InsR蛋白表達。
　　 結(jié)果：模型組InsR在肝臟、骨骼肌和脂肪組織中mRNA及卵巢中蛋白表達，均明顯低于正常組(P<0.0

6、5)，中藥組均顯著高于模型組(P<0.05)。胰島素刺激后，各組肝臟、脂肪、骨骼肌組織中InsR mRNA及卵巢中蛋白表達，均較刺激前明顯增多(P<0.05)。
　　 結(jié)論：補腎通脈方可改善伴IR的PCOS，其機制可能與提高胰島素靶組織InsR的表達，改善胰島素信號轉(zhuǎn)導等環(huán)節(jié)有關(guān)。
　　 第三部分：補腎通脈方對伴胰島素抵抗多囊卵巢綜合征大鼠胰島素受體底物-1表達的影響
　　 目的：觀察補腎通脈方對伴IR的PCOS

7、大鼠胰島素靶器官中胰島素受體底物-1(insulin receptor substrate-1，IRS-1)表達的影響，探討補腎通脈方改善伴IR的PCOS的機制。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共20天，聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機分為模型組和中藥組，另設13只正常組。中藥組大鼠以補腎通脈方干預。各組大鼠于動情后期，在門靜脈推注胰島素前后各處

8、死一半。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測各組大鼠肝臟、脂肪、骨骼肌IRS-1 mRNA表達，免疫印跡法(Western blot)檢測各組大鼠肝臟、脂肪中IRS-1蛋白表達，免疫組化檢測卵巢IRS-1蛋白表達。
　　 結(jié)果：模型組IRS-1在肝臟、脂肪、骨骼肌中mRNA、蛋白表達，及卵巢中蛋白表達，均明顯低于正常組(P<0.05，P<0.01)，中藥組均顯著高于模型組(P<0.05)。各組IRS-1在胰島素刺激后的表達均

9、較刺激前明顯增多(P<0.05)。
　　 結(jié)論：補腎通脈方可改善伴IR的PCOS，其機制可能與提高胰島素靶組織IRS-1的表達，改善胰島素信號轉(zhuǎn)導等環(huán)節(jié)有關(guān)。
　　 第四部分：補腎通脈方對伴胰島素抵抗多囊卵巢綜合征大鼠胰島素受體底物-1絲氨酸307磷酸化表達的影響
　　 目的：觀察補腎通脈方對伴IR的PCOS大鼠胰島素靶器官中胰島素受體底物-1絲氨酸307(insulin receptor substrate-1

10、 Ser307，IRS-1 Ser307)磷酸化表達的影響，探討補腎通脈方改善伴IR的PCOS的機制。
　　 方法：23日齡雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睪酮鈉9mg·100g-1·d-1共20天，聯(lián)合高脂飲食喂養(yǎng)80天建立伴IR的PCOS大鼠模型。成模大鼠隨機分為模型組和中藥組，另設13只正常組。中藥組大鼠以補腎通脈方干預。各組大鼠于動情后期，在門靜脈推注胰島素前及后各處死一半。免疫印跡法(Western blot)檢測各組大鼠

11、肝臟、脂肪IRS-1 Ser307蛋白表達，免疫組化檢測卵巢IRS-1 Ser307蛋白表達。
　　 結(jié)果：模型組IRS-1 Ser307磷酸化蛋白在肝臟、脂肪、卵巢中表達均明顯高于正常組(P<0.05，P<0.01)，中藥組均顯著低于模型組(P<0.05，P<0.01)。胰島素刺激后各組IRS-1 Ser307均較刺激前明顯減少(P<0.05)。
　　 結(jié)論：補腎通脈方可改善伴IR的PCOS，其機制可能與調(diào)節(jié)胰島素靶組