古銀杏雄株遺傳多樣性的ISSR分析及花粉用優(yōu)良單株初步選育研究.pdf

1、本文以全國主要銀杏分布區(qū)的古銀杏雄株為研究對象，對銀杏雄株遺傳多樣性進行了測定，并對不同地區(qū)的銀杏雄花生物學(xué)特性、花粉的超微結(jié)構(gòu)及多種營養(yǎng)成分進行了差異性分析。得出結(jié)論如下： 1、本文對影響銀杏ISSR-PCR擴增效果的一些因素如模板DNA濃度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火溫度等指標(biāo)進行篩選和優(yōu)化。篩選優(yōu)化出可用于銀杏ISSR-PCR分析較適宜的反應(yīng)條件：Taq酶0.3U，2μL的10×Buffer(含15mM

2、 MgC12)，模板DNA 40 ng，dNTP 0.2m mol/L，引物0.5μmol/L。PCR擴增程序：94℃變性5 min，然后進行38個循環(huán)：94℃變性30s，48℃～53℃(根據(jù)引物而定)退火30s，72℃延伸1min；最后72℃延伸10min，4℃終止反應(yīng)。 2、從60個工SSR引物中選出13個擴增條帶較多、信號強、背景清晰的引物用于ISSR-PCR反應(yīng)，13個引物對97個銀杏雄株進行擴增共擴增出114條DNA條

3、帶，其中多態(tài)性DNA條帶83條，占72.8％，每個引物擴增條帶數(shù)平均8.76條。銀杏雄株的平均有效等位基因數(shù)(Ne)為1.8117，平均基因多樣度為(h)0.4374，平均Shannon信息指數(shù)(Ⅰ)為0.6253。聚類結(jié)果顯示雄株間親緣關(guān)系與地理位置相關(guān)，結(jié)果表明銀杏雄株具有比較豐富的遺傳多樣性。 3、本研究借助掃描電鏡對33個銀杏古樹雄株的花粉外壁形態(tài)特征進行觀察，發(fā)現(xiàn)銀杏花粉外部形態(tài)基本一致，赤道面觀為橄欖形或梭形，側(cè)面觀

4、為長橢圓形，萌發(fā)溝與花粉近等長。但在光滑程度、紋飾特征、微孔情況等方面存在比較明顯的差別。結(jié)果表明，銀杏花粉形態(tài)具有多樣性和復(fù)雜性。 4、來自不同地區(qū)的33個銀杏古樹雄株單株間具花短枝上花穗數(shù)、花穗長、花穗寬、花藥數(shù)、花藥長、花藥寬、花粉長、花粉寬、絕對出粉率等性狀指標(biāo)均達(dá)極顯著差異水平。 5、33個銀杏雄株的花粉生活力平均值為73.42％。泰興02、郯城02、南雄02、泰興01和天目01幾個單株的花粉生活力較高，在生產(chǎn)

5、上可作為優(yōu)良授粉樹。 6、本文通過因子分析和聚類分析，初步挑選出了奉化01、南雄01、南雄02、通江02、西峽02、泰興01、廣德01、南京01、天目01、長興04、北京01、泰安02等12個單株作為選育花粉產(chǎn)量高的品種的備選單株。 7、銀杏花粉之間黃酮、內(nèi)酯、VB<,1>、VB<,2>、V<,C>和氨基酸含量差異極顯著。本試驗首次在植物花粉中檢測出內(nèi)酯成分。本文按照不同營養(yǎng)成分初步確定出營養(yǎng)成分含量較高的單株作為備選單

6、株：略陽01、重慶01、金寨01、南雄01、嵩縣01、安化01、康縣01、奉化01八個單株的花粉中黃酮、內(nèi)酯含量與黃酮內(nèi)酯總量與其他單株差異顯著，且含量較高，可作為花粉開發(fā)中黃酮內(nèi)酯方面的備選優(yōu)良單株；桂林09、略陽01、邳州01、桂林06、南雄02等5個單株可以作為VB<,1>含量較高的備選優(yōu)良單株；桂林09、邳州01、奉化01、都江堰01、泰安01等5個單株可以作為銀杏花粉中VB<,2>含量較高的備選優(yōu)良單株；泰興01、重慶01、南