上海地區(qū)流感嗜血桿菌耐藥性及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)是社區(qū)獲得性肺炎、化膿性腦膜炎、中耳炎和菌血癥等感染性疾病的主要病原體之一，在臨床居重要地位。近年來，全球流感嗜血桿菌對氨芐西林、SMZ-TMP的耐藥率普遍較高，部分地區(qū)出現(xiàn)對氟喹諾酮類耐藥。 副流感嗜血桿菌菌落形態(tài)與流感嗜血桿菌極為相似，但致病性弱，偶爾引起細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、尿道炎或上呼吸道感染，耐藥性監(jiān)測及耐藥機(jī)制研究鮮少開展。 目的： 調(diào)查上海地區(qū)流

2、感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌對常用抗菌藥的敏感性，及其對β內(nèi)酰胺類和喹諾酮類藥物的耐藥機(jī)制，為臨床治療該類細(xì)菌感染和控制耐藥性傳播提供依據(jù)。 方法： ①收集上海地區(qū)5家醫(yī)院2006年共109株流感嗜血桿菌與47株副流感嗜血桿菌臨床分離株，通過瓊脂稀釋法測定氨芐西林、氨芐西林-舒巴坦、環(huán)丙沙星和阿奇霉素等14種抗菌藥對受試嗜血桿菌屬細(xì)菌臨床分離株體外抗菌活性，結(jié)果按2006年版CLSI判斷，采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

3、分析。②采用頭孢硝噻吩紙片檢測受試嗜血桿菌屬細(xì)菌臨床分離株的β內(nèi)酰胺酶，并采用PCR方法對所有受試菌株的TEM型和ROB型β內(nèi)酰胺酶基因進(jìn)行擴(kuò)增并測序。③根據(jù)瓊脂平板稀釋法藥敏試驗(yàn)結(jié)果，篩選對環(huán)丙沙星、左氧氟沙星或莫西沙星耐藥流感嗜血桿菌；對其parC、parE、gyrA和gyrB基因的喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDRs)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測序，觀察有無氨基酸突變；采用Etest法測定使用外排泵抑制劑MC-207，110前后，環(huán)丙沙星對其MIC

4、改變；對其qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，觀察是否存在上述已知質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥基因。 結(jié)果： ①對32株受試菌株再次菌種鑒定，結(jié)果17株原鑒定為流感嗜血桿菌細(xì)菌最終鑒定結(jié)果與原鑒定結(jié)果不符(16株為最終鑒定副流感嗜血桿菌，1株為卡他莫拉菌)。受試109株流感嗜血桿菌臨床分離株對除氨芐西林和SMZ-TMP外的多數(shù)常用抗菌藥仍保持較高敏感性。其對氨芐西林敏感率為僅74.3％，而

5、對氨芐西林一舒巴坦等其他β內(nèi)酰胺類菌敏感率均達(dá)100％；對氟喹諾酮類亦保持較高敏感性，敏感率>99％；阿奇霉素和氯霉素對流感嗜血桿菌同樣具有較高抗菌活性，而SMZ-TMP和四環(huán)素對其的抗菌活性較差。流感嗜血桿菌對環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的敏感率顯著高于副流感嗜血桿菌(99.1％對66.0％，100％對58.1％和100％對66.0％，p均<0.01)。79株兒童流感嗜血桿菌菌株對氨芐西林和SMZ-TMP的敏感率低于30株成人菌株(

6、70.9％對83.3％和39.2％對56.7％)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4種喹諾酮類藥物對受試嗜血桿菌屬細(xì)菌的MIC結(jié)果均呈正相關(guān)，其中相關(guān)性最高的是環(huán)丙沙星和左氧氟沙星(r=0.93，p<0.001)，其次為左氧氟沙星和莫西沙星、環(huán)丙沙星和莫西沙星(r=0.92，p<0.001；r=0.90，p<0.001)。②156株嗜血桿菌屬細(xì)菌中，37株(23.7％)經(jīng)頭孢硝噻吩紙片檢測顯示β內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽性，其中流感嗜血桿菌28株，副流感嗜血桿

7、菌9株，兩者β內(nèi)酰胺酶檢測陽性率無明顯差異(25.7％對19.1％，p=0.378)。156株嗜血桿菌屬細(xì)菌中，37株(23.7％)經(jīng)PCR擴(kuò)增檢測顯示TEM型β內(nèi)酰胺酶基因陽性，與頭孢硝噻吩紙片法試驗(yàn)結(jié)果完全符合。選取部分菌株TEM基因的擴(kuò)增產(chǎn)物送檢測序，證實(shí)均為TEM-1型。受試嗜血桿菌屬菌株經(jīng)PCR擴(kuò)增，未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)ROB型β內(nèi)酰胺酶菌株。所有對氨芐西林不敏感的嗜血桿菌屬細(xì)菌(35株)β內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)均陽性，未發(fā)現(xiàn)β內(nèi)酰胺酶陰性耐氨芐西

8、林(BLNAR)菌株。③根據(jù)瓊脂平板稀釋法藥敏試驗(yàn)結(jié)果，僅1株兒童來源流感嗜血桿菌菌株(C20)對環(huán)丙沙星耐藥(MIC=2μg/mL)。該菌株為2006年3～6月采自上海市兒童醫(yī)院。奈啶酸、左氧氟沙星和莫西沙星對其的MIC分別為64μg/mL、0.5μg/mL和0.5μg/mL。未發(fā)現(xiàn)流感嗜血桿菌對左氧氟沙星或莫西沙星耐藥。PCR方法對菌株C20的QRDRs區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增并測序，發(fā)現(xiàn)其gyrA基因84位絲氨酸突變?yōu)榱涟彼?S84L)，par

9、C基因206位甘氨酸突變?yōu)榫彼?G206R)，余未發(fā)現(xiàn)有意義的突變。Etest法測定使用MC-207，110前后，環(huán)丙沙星對C20的MIC均為1μg/mL，未發(fā)生改變。PCR方法對C20的qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr基因進(jìn)行擴(kuò)增，未發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果。 結(jié)論： 除氨芐西林和SMZ-TMF外，上海地區(qū)流感嗜血桿菌對常用抗菌藥仍保持較高敏感率。副流感嗜血桿菌對氟喹諾酮類的耐藥率顯著高于流感嗜血桿菌，細(xì)