IFN-α刺激相關(guān)細胞蛋白TIIMPSC和S24v2的功能分析.pdf

1、本文涉及IFN-α刺激人成纖維細胞KMB-17株的所引起的細胞內(nèi)基因表達的變化，通過IFN-α刺激人二倍體細胞KMB-17后的基因反應(yīng)的差異分析，成功克隆到兩個差異基因，其中IFN-α刺激特異表達得蛋白分子為類CD69 Ⅱ型膜蛋白(type Ⅱ membrane protein similar to CD69，TIIMPSC)TIIMPSC，長度為697bp的cDNA基因(基因庫號碼：AB015628)；另一個差異蛋白為IFN-α刺激下

2、調(diào)表達蛋白，cds長度為593bp(基因庫號碼：NM_001026)，經(jīng)對比分析確定為核糖體復(fù)合物亞單位蛋白S24變異體2(ribosomal protein S24 transcript variant 2，S24V2)。分別將基因克隆到融合表達載體pET-28a和pGEx-5x-1，構(gòu)建了pET-TIIMPSC和pGEX-S24v2表達質(zhì)粒，表達純化獲得較高純度的目的蛋白，用該蛋白免疫小鼠后制備的特異抗體，蛋白印跡實驗表明原核表達的

3、的蛋白能被該抗體特異識別。 對TIIMPSCcDNA編碼蛋白的分析表明，該蛋白具有膜蛋白特性，這一點為該蛋白在人成纖維細胞包膜的免疫熒光亞細胞定位所證實。細胞增殖實驗和JAK/STAT信號通路相關(guān)研究結(jié)果提示IFN-α刺激細胞后上調(diào)表達的TIIMPSC蛋白能夠明顯推進人成纖維細胞進入S期，其在JAK/STAT信號通路中所處的位置和功能分析提供了一定的線索：免疫共沉淀實驗實驗顯示了TIIMPSC蛋白通過JAK/STAT信號傳導(dǎo)介導(dǎo)

4、的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活。 S24v2作為胞內(nèi)核糖體復(fù)合物的亞單位之一正常情況下參與了核糖體構(gòu)成和蛋白翻譯的過程。IFN-α的刺激能夠特異阻滯該蛋白的表達，在轉(zhuǎn)染pcDNA-S24v2的經(jīng)IFN-α預(yù)處理的KMB-17細胞中，脊髓灰質(zhì)炎Ⅰ型病毒(Polio virus，type Ⅰ)的增殖得到了補償。通過檢測在轉(zhuǎn)染peDNA-S24v2的KMB-17細胞中的病毒滴度，下調(diào)或干擾S24v2的表達可能延遲病毒蛋白的合成，從而影響其復(fù)制，