2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文bcl-2基因轉(zhuǎn)染和CNTF活性蛋白聯(lián)合對家兔RPE細(xì)胞凋亡保護(hù)作用的實驗研究姓名:李素芳申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):眼科學(xué)指導(dǎo)教師:魏銳利20040501b c l 一2 基因轉(zhuǎn)染和C N T F 活性蛋白聯(lián)合對家兔R P E 細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用的實驗研究中文摘要本文主要研究目的是對b c l 一2 基因轉(zhuǎn)染和C N T F 活性蛋白聯(lián)合對吲哚美辛誘導(dǎo)的家兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞( r R P E ) 凋亡的保護(hù)作用進(jìn)

2、行研究。本研究分為三部分。第一部分:家兔R P E 細(xì)胞的原代培養(yǎng)首先進(jìn)行家兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞( r R P E ) 的分離、原代培養(yǎng)、傳代及凍存復(fù)蘇等,然后通過光學(xué)顯微鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法等方法對培養(yǎng)的家兔R P E 細(xì)胞進(jìn)行鑒定。第二部分:b c l - 2 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的構(gòu)建、轉(zhuǎn)染及鑒定首先進(jìn)行目的基因b c l - 2 和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體行H i n d l I I + S t uI 雙酶切后連接,構(gòu)建b c l 一2 重組

3、逆轉(zhuǎn)錄病毒,然后通過I n v i t r o g e nL i p o f e c t a m i n e I ”脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法用b c l 一2 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的家兔原代R P E 細(xì)胞,G 4 1 8 ( 濃度為2 0 0 ¨g /m ] ) 篩選出表達(dá)b c l 一2 蛋白的家兔R P E 細(xì)胞克隆,并使家兔R P E 細(xì)胞克隆的大量培養(yǎng)擴(kuò)增,建立穩(wěn)定表達(dá)b c l 一2 蛋白的家兔R P E 細(xì)胞株。采用基因測

4、序和P C R 方法對b c l 一2 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行鑒定;采用R T ~P C R 和W e s t e r nb l o t t i n g印跡法對穩(wěn)定表達(dá)b c l 一2 蛋白的家兔R P E 細(xì)胞株進(jìn)行鑒定。第三部分:家兔R P E 細(xì)胞的抗凋亡實驗研究首先用不同梯度濃度( 0 、1 0 0 、2 0 0 、4 0 0 、6 0 0 、8 0 0 和1 0 0 0 p m o l /L ) 的吲哚美辛( i n d o m

5、e t h a e i n ,I N ) 作用培養(yǎng)的家兔R P E 細(xì)胞,篩選出I N 使家兔R P E細(xì)胞凋亡的最佳濃度( 2 0 0 um o l /L ) ,建立家兔R P E 細(xì)胞凋亡模型;其次用不同梯度濃度( 0 、1 0 、2 0 、4 0 n g /m 1 ) 的C N T F 活性蛋白作用家兔R P E 細(xì)胞,篩選出有利于家兔R P E 細(xì)胞生長的最佳濃度( 2 0 n g /m 1 ) :然后用濃度為2 0 0 um

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