Decorin在腦缺血防治中的功能及機制研究.pdf

1、目的：腦微血管內(nèi)皮細胞不僅僅是血腦屏障最主要的組分，而且它通過產(chǎn)生和釋放各種活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)血管的功能，維持正常血管自身穩(wěn)定。缺血性腦卒中能引發(fā)內(nèi)皮細胞的損傷，破壞血管內(nèi)皮的完整性。因此血管內(nèi)皮細胞損傷也被公認為是許多腦血管疾病的病理基礎(chǔ)。本課題組通過前期大鼠全基因組芯片的方法比較大鼠腦微血管內(nèi)皮和心臟微血管內(nèi)皮差異表達的基因。發(fā)現(xiàn)核心蛋白聚糖（Decorin，DCN）特異高表達于腦微血管內(nèi)皮細胞中，因此本研究擬探究腦微血管內(nèi)皮內(nèi)源性活性

2、物質(zhì)DCN在腦血管疾病中的作用，為腦血管疾病的防治提供新的思路。
　　 方法：通過構(gòu)建腺病毒載體pAd-DCN-IRES2-EGFP，并通過Western blot和實時定量PCR方法檢測體外腦微血管內(nèi)皮細胞缺氧/復(fù)氧模型（缺氧培養(yǎng)（含95％N25％CO2）2 h，再復(fù)氧（正常的細胞培養(yǎng)條件）24h）中DCN蛋白水平及mRNA水平的表達變化。Western blot方法檢測人鼠中動脈栓塞模型缺血不同時間血清中DCN的表達，及腦梗

3、病人血清中DCN的表達。腦血管內(nèi)皮細胞缺氧/復(fù)氧模型中DCN對粘附分子及細胞外基質(zhì)（ICAM-1.VCAM-1和MMP-2，MMP-9）的影響。實時定量PCR方法檢測體外腦微血管內(nèi)皮細胞缺氧/復(fù)氧損傷后緊密連接蛋蛋白（tightjunction protein）：閉鎖小帶蛋白（zonulaoccludens protein）-Zo-1、Zo-2，咬合蛋白（occludin），閉合蛋白（claudins）的表達變化。
　　 結(jié)論：

4、通過整體、細胞水平各種病理模型研究DCN在腦血管病中的功能，并從腦微血管通透性、腦微血管內(nèi)皮粘附功能等方面研究發(fā)現(xiàn)DCN在腦微血管內(nèi)皮特異表達，是腦微血管內(nèi)皮細胞內(nèi)源性的活性物質(zhì)。在腦微血管內(nèi)皮細胞缺氧/復(fù)氧模型中DCN的蛋白及mRNA水平表達顯著增加，并在復(fù)氧24h后表達最高。因此，我們推測DCN參與腦缺血的病理生理過程。經(jīng)尾靜脈注射DCN后，DCN能顯著降低腦缺血再灌注損傷引起的梗死面積（P<0.05），說明DCN對腦缺血及再灌注損

5、傷具有一定的保護作用，其機制可能與DCN能濃度依賴性地降低粘附分ICAM-1，VCAM-1的表達，具有抗粘附的作用。此外，閉鎖小帶蛋白（ZO-1、Zo-2），咬合蛋白（occluding）在缺氧2h，復(fù)氧24h培養(yǎng)后表達開始降低，閉合蛋白（claudin-1）復(fù)氧48h后表達開始降低。而DCN預(yù)處理組中，Zo-1，Zo-2，occludin和claudin-1分別較之前增強了對缺氧的耐受性，降低了內(nèi)皮細胞的通透性，這可能與DCN能濃度依