不同NAD含量培養(yǎng)條件下APP毒力的研究及多價(jià)滅活疫苗的研制.pdf

1、豬傳染性胸膜肺炎(Porcine Pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus．Pleuropneumoniae，APP)引起的一種常見的呼吸道傳染病，各年齡的豬只均可感染。豬群感染胸膜肺炎放線桿菌后，主要表現(xiàn)為精神沉郁，體溫升高，呼吸困難等臨床癥狀，并出現(xiàn)特征性的出血性肺炎和胸膜炎。本病在世界各養(yǎng)豬國家普遍存在，近年來，流行日趨嚴(yán)重，成為大規(guī)模養(yǎng)豬的五大疫病之一。 本研究共分為兩大部分：

2、 第一部分：不同NAD含量條件下培養(yǎng)的血清5型豬胸膜肺炎放線桿菌對小白鼠的致病性和免疫保護(hù)性。 將在含有0.05％(V/V)尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamideademine dinucleotide，NAD)和0.001％(V/V)NAD的LB平板flauria broth，LB)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的血清5型豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)，分別以3×10<'9>CFU/只的菌量對30日齡小白鼠進(jìn)行接種，觀察不同NAD

3、含量條件下培養(yǎng)的APP對小白鼠的致病性。結(jié)果表明：含0.001％(V/V)NAD條件下培養(yǎng)的血清5型APP對小白鼠的致病性較強(qiáng)，小白鼠接種APP后，多數(shù)表現(xiàn)肺臟嚴(yán)重出血；而含0.05％(V/V)NAD條件下培養(yǎng)的血清5型APP接種小白鼠后，只有少數(shù)肺臟出血嚴(yán)重，多數(shù)表現(xiàn)為輕度出血。將上述培養(yǎng)的APP按常規(guī)方法制備油乳劑滅活疫苗，將制備的滅活疫苗分別在第3周齡和第6周齡對小白鼠進(jìn)行免疫接種，在2免后3周分別對免疫的小白鼠進(jìn)行同源攻擊，并對

4、免疫前后小白鼠的抗體效價(jià)進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：含0.001％(V/V)NAD條件下培養(yǎng)的血清5型APP制備的滅活疫苗對小白鼠的保護(hù)率與含0.05％(V/V)NAD條件下培養(yǎng)的血清5型APP制備的滅活疫苗對小白鼠的保護(hù)率差異不顯著，但含0.001％(V/V)NAD條件下培養(yǎng)的血清5型APP制備的滅活疫苗免疫小白鼠，用血清5型APP同源攻擊后，發(fā)病的小白鼠肺臟出血較輕，而含0.05％(V/V)NAD條件下培養(yǎng)的血清5型APP制備的滅活疫苗免疫

5、小白鼠攻毒后，發(fā)病的小白鼠肺臟出血嚴(yán)重。可見在不同NAD含量條件下培養(yǎng)的APP對小白鼠的致病性和免疫保護(hù)力不同，在含NAD較少的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的APP制備的油佐劑滅活疫苗對小白鼠的保護(hù)力較強(qiáng)。第二部分：豬胸膜肺炎放線桿菌油佐劑多價(jià)滅活疫苗的制備及對小白鼠的保護(hù)力根據(jù)適當(dāng)降低培養(yǎng)基中NAD的含量可以增加APP滅活疫苗保護(hù)力的研究結(jié)果，我們將從山東地區(qū)分離鑒定的血清1、3、5、7型．APP經(jīng)培養(yǎng)滅活后按照等體積進(jìn)行混和并加入適量油佐劑按照常規(guī)

6、方法制備油佐劑多價(jià)滅活疫苗，將制備的滅活疫苗以0．4mL/只的劑量分別在第3周齡和第5周齡對小白鼠進(jìn)行免疫接種，在二免后3周分別對免疫組和對照組小白鼠進(jìn)行同源攻擊，結(jié)果，制備的油佐劑多價(jià)滅活疫苗對4種血清型APP攻擊的保護(hù)率均達(dá)到100％，二次免疫后3周小白鼠血清抗體水平最高，ELISA檢測450nm下小鼠血清抗體OD值接近0.6，初次免疫10周后小白鼠血清抗體450nm下OD值仍然維持在0.4以上。結(jié)果表明，制備的油佐劑多價(jià)滅活疫苗對