LRRK2突變體誘導人多巴胺能神經元凋亡的蛋白組學的初步研究.pdf

1、學校代碼:學號:10246062101012灌大碩士學位論文LRRKZ突變體誘導人多巴胺能神經元凋亡的蛋白組學的初步研究院系:__匕海醫(yī)學院專業(yè):神經生物學姓名:陳潔一導師:陳俊教授一導師組:高艷琴曹國棟完成日期:2009年5月復旦大學上海醫(yī)學院2009年碩士論文摘要1.中文摘要背景:帕金森病是第二大神經系統(tǒng)退行性疾病，其發(fā)病率僅次于老年癡呆癥，在50歲人群中其發(fā)病率約為0.3%，而在85歲人群中則高達4.3%。目前對帕金森病的發(fā)病機制

2、還不完全清楚，近年來對家族性帕金森病的研究發(fā)現(xiàn)，LRRKZ(Leucine一richrepeatkinase2)基因的突變與常染色體顯性帕金森病密切相關。在散發(fā)性病人中LRRKZ的突變率約為3%，而在家族性帕金森病人中突變率卻高達13%，并且這些病人的臨床表現(xiàn)與自發(fā)性帕金森病無法區(qū)別，因此對LRRKZ突變體的毒性研究將有助于加深對帕金森病發(fā)病機制的理解。方法:我們利用脂質體LIPofectamineZ000把GFP質粒和LRRKZ質粒共

3、轉染到SH一SYSY細胞中建立凋亡模型，并以綠色熒光為信號用流式細胞儀進行細胞分選，收集陽性轉染細胞。然后對分選得到的細胞進行2一D蛋白電泳和MS一MS質譜分析，找出可能出現(xiàn)差異表達的蛋白，并利用westemblot免疫印跡法對這些蛋白進行驗證。最后，我們對表達確實發(fā)生變化的蛋白進行了初步的功能研究。結果:本課題建立了LRRKZ突變體G20195一LRRKZ誘導SH一SYSY細胞株凋亡的細胞模型，并通過蛋白組學研究方法初步探討了該突變體

4、過表達后細胞蛋白表達譜的變化。與空白對照組和野生型組相比，在G20195一LRRKZ過表達的細胞中以下6種蛋白的表達發(fā)生了變化:proteindisulfideisomerase、EEFlo(euk娜otietranslationenlongationfaet1gamma)、laetatedehydrogenaseB、GSTPI(glutathiones一transferasepl)、GDIalpha(GDpdissoeiationin