抗生素LP2產(chǎn)生菌的改良、純化技術(shù)及防病機(jī)理研究.pdf

1、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文抗生素LP2產(chǎn)生菌的改良、純化技術(shù)及防病機(jī)理研究姓名：張崇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：吳元華20070501沈m農(nóng)業(yè)^學(xué)碘J咩位論文摘要抗生素LP2是枯草芽孢桿菌SN一02(BaciHussubtilis)產(chǎn)生的脂肽類抗生豢。本文對(duì)其產(chǎn)生菌SN02菌株進(jìn)行了遺傳改良、搖瓶發(fā)酵條件、發(fā)酵液代謝物理化性質(zhì)、化學(xué)成分分析及純化技術(shù)、發(fā)酵液對(duì)煙草靶斑病菌的作用機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。結(jié)果如下：1采用自然選育

2、和紫外誘變相結(jié)合的方法對(duì)BaciHussubtil括進(jìn)行了菌種改良，獲得高產(chǎn)、高效、避傳穩(wěn)定的菌株SN023，它比原始菌株抑卣活性提高將近30％。確定紫外線最佳誘變劑量為90s，致死率約75％，正變率為30％。2E／29種植物病原菌為供試菌，杯碟法測(cè)定改良菌株SN023發(fā)酵液的抑菌譜；以煙草靶斑病菌為指示菌，杯碟法測(cè)定發(fā)酵液的熱穩(wěn)定眭，酸堿穩(wěn)定性、光照穩(wěn)定性及時(shí)儲(chǔ)藏性。結(jié)果表明，SN023發(fā)酵液抑菌譜較廣，對(duì)27種供試植物病原菌的抑菌直

3、徑在25ram以上，尤其對(duì)黃瓜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)、番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea)、煙草靶斑病菌(Thanatephoruscumcumeris)等具有強(qiáng)烈的抑制作用。將發(fā)酵液于554C、85℃，120“C處理25h抑菌活性沒有明顯變化：對(duì)強(qiáng)酸和強(qiáng)堿穩(wěn)定性較差；耐儲(chǔ)藏性和光穩(wěn)定性較好。3通過單因子試驗(yàn)和正變?cè)囼?yàn)明確了改良菌株SN

4、02—3的最佳配方。SN一023菌株的搖瓶發(fā)酵的最佳碳源是蔗糖，最佳氯源為花生餅粉，最佳培養(yǎng)基配方(％)：牛肉膏05％或l％花生餅粉，蔗糖4％，NaCl01％，NH4N030I％。明確了最佳發(fā)酵條件，最佳發(fā)酵條件：接種量05％：培養(yǎng)基起始pH68～75：裝液量50ml／250ml三角瓶。研究表職，無機(jī)鹽及微量元素對(duì)SN023產(chǎn)生菌的搖瓶發(fā)酵具有一定的影響，在菌株SN一023發(fā)酵過程中適量的MnS04和K2s04可提高發(fā)酵液活性；而FeS

5、04和ZnS04則抑制抗生素的產(chǎn)生；加入少量MgS04后，發(fā)酵效果與對(duì)照相當(dāng)。4進(jìn)行了改良菌株發(fā)酵液產(chǎn)生活性物質(zhì)的純化技術(shù)研究，得到了抗生素LP2的粗品。pH層析研究表明，發(fā)酵液是多組分的。以氯仿：甲醇：水(65：25：4)為展層劑利用薄層層析法(TLC)分析了各組分的化學(xué)成分，推測(cè)有兩個(gè)組分為脂肽類抗生素，其中一個(gè)為本實(shí)驗(yàn)室已確定結(jié)構(gòu)的表面活性素，用硅膠柱層析吸附色譜法得到了另一抗生素LP2的粗品。5以煙草靶斑病菌(Thanateph

6、oruscumcumeris)為指示菌，從對(duì)病原菌作用和對(duì)植株抗病性影響兩方面研究了SN023菌株發(fā)酵液防治病害的作用機(jī)理。結(jié)果表明，SN023菌株發(fā)酵液對(duì)煙草靶斑病菌具有較強(qiáng)的抑制和殺菌作用。主要表現(xiàn)在：破壞菌絲體的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)含物外滲，菌絲體畸變、縊縮、斷裂和溶解，使菌絲重量減少，從而抑制菌絲體的正常生長；但是其作用位點(diǎn)不是菌體的蛋白。SN023無菌濾液也可誘導(dǎo)PPO、PAL酶活的提高，但是對(duì)POD、CAT的誘導(dǎo)不是很明顯