五指山放線菌分離菌株活性測(cè)定及WZ254菌株產(chǎn)生的抗生素分離純化.pdf

1、辣椒疫霉和香蕉枯萎鐮刀菌4號(hào)小種是熱帶地區(qū)重要的植物土傳病害病原菌，目前尚無(wú)有效的生物農(nóng)藥進(jìn)行防治。五指山是海南最大的國(guó)家自然保護(hù)區(qū)，也是世界上現(xiàn)存地勢(shì)最高的原始熱帶雨林之一，蘊(yùn)藏著極其豐富的放線菌資源。本研究從前期分離獲得的1261株放線菌中隨機(jī)挑選了511株放線菌進(jìn)行了抗辣椒疫霉菌和香蕉枯萎病菌的活性評(píng)價(jià)，并從中挑選出1株對(duì)辣椒疫霉和香蕉枯萎病均有較高拮抗活性的菌株WZ254進(jìn)行了抗生素的分離純化，其主要研究結(jié)果如下： 一、

2、以香蕉枯萎病菌4號(hào)小種和辣椒疫霉菌為抑制對(duì)象，通過(guò)平板對(duì)峙培養(yǎng)法對(duì)511株放線菌的抑菌活性進(jìn)行了初步測(cè)定，篩選出對(duì)辣椒疫霉菌具強(qiáng)抑菌活性的菌株8株：WZ41、WZ159、WZ184、WZ254、WZ391、WZ420、WZ423和WZ428，其抑菌距離分別是18mm、18mm、16mm、20mm、16mm、17mm、18mm、17mm，具較強(qiáng)抑菌活性的菌株6株：WZ142、WZ149、WZ227、WZ232、WZ235、WZ258、WZ

3、342、WZ349、WZ396、WZ411，其抑菌距離分別是12mm、11mm、13mm、12mm、13mm、13.5mm、10mm、14mm、11mm、10mm；篩選出對(duì)香蕉枯萎病菌4號(hào)小種具較強(qiáng)抑菌活性的菌株4株：WZ235、WZ254、WZ342、WZ423，其抑菌距離分別是13.5mm、13mm、11mm、10.5mm。 二、對(duì)篩選出的對(duì)辣椒疫霉菌和香蕉枯萎病菌有活性放線菌在五指山的分布進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)對(duì)兩種病菌均

4、有活性的放線菌約有2/3都分布在樣路線Ⅲ的土壤樣本中(沿著山路，在山路的兩邊約10～20m處采樣)，且對(duì)辣椒疫霉有活性的放線菌約有1/2分布在海拔高度1000m以下，對(duì)香蕉枯萎病菌有活性的放線菌約有1/2分布在海拔高度1000m以下。 三、選取對(duì)辣椒疫霉菌和香蕉枯萎病菌都有強(qiáng)抑菌活性的WZ254菌株進(jìn)行了抗生素的分離純化。WZ254發(fā)酵液上清發(fā)酵液經(jīng)減壓濃縮后得到的粘稠膏狀物，為黑褐色，糖漿味，經(jīng)乙酸乙酯萃取后，其水相和脂相均對(duì)

5、辣椒疫霉病菌有活性，但對(duì)香蕉枯萎病菌均沒(méi)有活性。經(jīng)硅膠層析和結(jié)晶法相結(jié)合分離獲得了一個(gè)主成分純化合物，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行TLC對(duì)照，與已知抗生素-豐加霉素一致，取1mg稀釋成1mg/mL的濃度做辣椒疫霉病菌的抑菌活性，對(duì)辣椒疫霉具有極強(qiáng)的抑菌活性。 四、對(duì)WZ254菌株進(jìn)行了形態(tài)觀察，WZ254的氣生菌絲體灰白色，基內(nèi)菌絲體無(wú)色，孢子絲呈開(kāi)螺旋卷曲。 五、對(duì)WZ254菌株的生理生化特征測(cè)定，結(jié)果表明，WZ254菌株能產(chǎn)生蛋白

6、酶使明膠液化；能使硝酸鹽還原；能產(chǎn)生淀粉酶使淀粉水解；能利用尿素：不產(chǎn)生纖維素酶；不產(chǎn)生H2S；不能產(chǎn)生凝乳酶使脫脂牛奶凝固，而產(chǎn)生蛋白酶使脫脂牛奶胨化；不能在酪氨酸培養(yǎng)基上產(chǎn)生黑色素。 六、對(duì)WZ254菌株進(jìn)行了16SrDNA測(cè)序分析。結(jié)果表明，WZ254菌株與鏈霉菌屬的系列一致性達(dá)99％，說(shuō)明WZ254菌株屬于鏈霉菌屬。根據(jù)WZ254菌株的形態(tài)特征、生理生化特性和16SrDNA測(cè)序分析結(jié)果，WZ254菌株與白刺鏈霉菌和原絳紅