慢傳輸型便秘大鼠血漿及腸道胃動(dòng)素變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 本研究課題利用大黃灌胃建立慢傳輸型便秘大鼠模型，通過測(cè)定模型大鼠血漿及十二指腸、回腸、橫結(jié)腸組織勻漿中胃動(dòng)素(MTL)含量，觀察模型大鼠腸道胃動(dòng)素免疫反應(yīng)性變化，探討血漿及腸道MTL水平與慢傳輸型便秘的關(guān)系。 方法： 1、動(dòng)物分組：選取健康Wistar大鼠40只，雌雄各半，按照完全隨機(jī)的方法進(jìn)行分組，實(shí)驗(yàn)組20只，對(duì)照組20只，分組后各組間體重、性別無顯著性差異。 2、動(dòng)物處理：實(shí)驗(yàn)組采用大黃浸液

2、灌胃，首日劑量為800mg/kg(生粉)，此后每日劑量在前一日基礎(chǔ)上增加200mg/kg(生粉)，直至實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)半數(shù)大鼠糞便變稀，保持劑量至80％的稀便消失，繼續(xù)加量給藥，至又有半數(shù)大鼠糞便變稀，如此程序循環(huán)3次，待實(shí)驗(yàn)組第三次80％的稀便消失一周后停止建模，對(duì)照組以同等體積蒸餾水灌胃。 3、標(biāo)本取材：實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠禁食8小時(shí)后乙醚麻醉，股動(dòng)脈取抗凝血3ml，切取距幽門5cm十二指腸、距回盲瓣5cm回腸、橫結(jié)腸中段組織各兩塊

3、，每塊長(zhǎng)約1cm，其中一塊組織多聚甲醛固定，包埋切片后進(jìn)行HE染色、MTL免疫組織化學(xué)染色，觀察免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)變化。另一塊組織稱重，勻漿，應(yīng)用熒光分光光度法測(cè)量血漿及組織勻漿中MTL含量。 4、半定量分析：根據(jù)MTL免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的分布密度及活動(dòng)性強(qiáng)弱，做相對(duì)半定量比較。所有視野未見陽(yáng)性細(xì)胞為(-)；有少數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞為(+)，染色為淡黃色；陽(yáng)性細(xì)胞較多見為(++)，染色為棕黃色；陽(yáng)性細(xì)胞多見為(+++)，染色為棕褐色

4、。 5、圖像分析：在CMIAS系列多功能病理圖像分析系統(tǒng)下，每組選5例染色良好的切片，在顯微鏡物鏡放大10倍下觀察，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，共25個(gè)視野攝入計(jì)算機(jī)(分辨率為800×600)，測(cè)量每個(gè)視野陽(yáng)性染色區(qū)域的表面積密度，即面密度。最后計(jì)算每組的平均值。并用尼康光鏡照相機(jī)拍攝典型視野。 6、統(tǒng)計(jì)分析：本實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)采用X±s表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，選用成組t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。

5、半定量分析結(jié)果采用Excel編程統(tǒng)計(jì)，檢驗(yàn)方法選用成組設(shè)計(jì)多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis法)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。 結(jié)果： 1、腸道大體病理變化及HE染色：兩組大鼠腸道外觀無明顯差別，結(jié)腸粘膜無色素沉著。對(duì)照組大鼠腸道切片HE染色未發(fā)現(xiàn)病變，實(shí)驗(yàn)組大鼠腸道切片HE染色可見粘膜慢性炎癥改變。 2、MTL免疫組織化學(xué)結(jié)果：腸道的MTL免疫組織化學(xué)染色顯示其陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色沉淀。十二指腸、回腸粘

6、膜及粘膜下層可見MTL免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞分布，MTL免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞呈圓形，著色淡。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組十二指腸肌層及肌間神經(jīng)叢、回腸肌層及肌間神經(jīng)叢以及橫結(jié)腸全層未見陽(yáng)性細(xì)胞及陽(yáng)性纖維。實(shí)驗(yàn)組十二指腸MTL免疫反應(yīng)性較對(duì)照組明顯降低(p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組回腸MTL免疫反應(yīng)性較對(duì)照組明顯降低(P<0.05)。對(duì)MTL免疫組織化學(xué)圖像分析的結(jié)果與半定量分析一致。 3、血漿中MTL含量：實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿中MTL含量較對(duì)照組降低(p<0.05

7、)。 4、腸道組織勻漿中MTL含量：實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠十二指腸組織勻漿中MTL含量均高于同組回腸組織勻漿中MTL 含量(p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組大鼠十二指腸組織勻漿中MTL含量較對(duì)照組十二指腸組織勻漿中MTL含量降低(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組大鼠回腸組織勻漿中MTL含量較對(duì)照組回腸組織勻漿中MTL含量降低(p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠橫結(jié)腸組織勻漿中MTL均未測(cè)出。 結(jié)論： 1、應(yīng)用大黃灌胃制造STC大鼠模型