脂質(zhì)微泡的制備及應(yīng)用研究.pdf

1、目的:
　　 1、篩選脂質(zhì)微泡用磷脂材料、起泡劑和凍干支撐劑,確定脂質(zhì)微泡處方
　　 2、確定脂質(zhì)微泡的凍干工藝
　　 3、考察脂質(zhì)微泡凍干粉的穩(wěn)定性影響因素,確定脂質(zhì)微泡凍干粉的儲(chǔ)存條件
　　 4、考察脂質(zhì)微泡的造影效果
　　 5、制備PEG及肝素修飾化的脂質(zhì)微泡,并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行考察
　　 6、采用體外和體內(nèi)試驗(yàn),考察鹽酸表柔比星脂質(zhì)微泡的藥效,并考察不同給藥方式對(duì)藥效的影響
　　

2、 方法:
　　 1、應(yīng)用不同類(lèi)型和比例的磷脂材料/磷脂材料混合物、起泡劑和凍干支撐劑制備脂質(zhì)微泡,并通過(guò)凍干粉形態(tài)及復(fù)溶性、脂質(zhì)微泡濃度、脂質(zhì)微泡形態(tài)、脂質(zhì)微泡粒徑及粒徑分布等作為指標(biāo),對(duì)脂質(zhì)微泡的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 2、測(cè)定不同處方組成的脂質(zhì)微泡凍干前預(yù)混物的共晶點(diǎn)、共熔點(diǎn),并通過(guò)不同的凍干程序?qū)χ|(zhì)微泡預(yù)混物進(jìn)行凍干,以?xún)龈煞坌螒B(tài)及復(fù)溶性、脂質(zhì)微泡濃度、脂質(zhì)微泡形態(tài)、脂質(zhì)微泡粒徑及粒徑分布等作為指標(biāo),對(duì)脂質(zhì)微泡的

3、質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 3、設(shè)計(jì)高溫、低溫、光照試驗(yàn)對(duì)脂質(zhì)微泡凍干粉的穩(wěn)定性影響因素進(jìn)行考察,分別在5天和10天取樣,以?xún)龈煞坌螒B(tài)及復(fù)溶性、脂質(zhì)微泡濃度、脂質(zhì)微泡形態(tài)、脂質(zhì)微泡粒徑及粒徑分布等作為指標(biāo),對(duì)不同條件下的脂質(zhì)微泡進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 4、家兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,應(yīng)用不同的脂質(zhì)微泡對(duì)其肝部進(jìn)行超聲造影,以造影開(kāi)始時(shí)間、持續(xù)時(shí)間及造影效果等為指標(biāo),對(duì)造影效果進(jìn)行評(píng)估。
　　 5、應(yīng)用mPEG-DSPE和肝素修飾化泊洛沙

4、姆兩種材料,對(duì)脂質(zhì)微泡進(jìn)行表面修飾,并對(duì)修飾化的脂質(zhì)微泡的微泡質(zhì)量、穩(wěn)定性影響因素和造影效果進(jìn)行考察。
　　 6、制備鹽酸表柔比星脂質(zhì)微泡,體內(nèi)試驗(yàn)選用HL-60腫瘤細(xì)胞對(duì)鹽酸表柔比星脂質(zhì)微泡的腫瘤抑制作用進(jìn)行考察,體內(nèi)選用HL-60、colo-205、HCT-116對(duì)鹽酸表柔比星脂質(zhì)微泡的腫瘤抑制作用進(jìn)行考察,并比較不同的給藥方式對(duì)腫瘤抑制作用的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:氫化蛋黃磷脂、D

5、SPC+DPPG(9:1)、DMPC+DPPG(9:1)三種磷脂/磷脂混合物作為脂質(zhì)微泡成膜材料、吐溫-80為起泡劑、Poloxamer188為凍干支撐劑,磷脂材料、起泡劑、凍干支撐劑比例為2:5:50時(shí),脂質(zhì)微泡的質(zhì)量較好。制備的脂質(zhì)微泡具有良好的外觀(guān)及復(fù)溶性,脂質(zhì)微泡濃度可達(dá)6.5×108個(gè)/ml,85％以上粒徑在2～8μm,微泡穩(wěn)定性良好。
　　 2、凍干工藝為:
　　 -22℃以下4h
　　 10℃900

6、min
　　 30℃600min
　　 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:0℃時(shí),5天微泡復(fù)溶性有所下降,數(shù)量明顯低于對(duì)照(P<0.05),粒徑增大(P<0.05),10天時(shí),復(fù)溶性降低,復(fù)溶后出現(xiàn)碎屑,數(shù)量明顯低于對(duì)照(P<0.05),粒徑增大(P<0.05)；25℃時(shí),脂質(zhì)微泡各方面性能與對(duì)照組沒(méi)有差別；40℃時(shí),脂質(zhì)微泡的復(fù)溶性略有下降,其余方面與對(duì)照相當(dāng)；強(qiáng)光照射時(shí),脂質(zhì)微泡各方面性能與對(duì)照組沒(méi)有差別。
　　 4、造影實(shí)

7、驗(yàn)結(jié)果顯示:氫化蛋黃磷脂、DSPC+DPPG(9:1)、DMPC+DPPG(9:1)三種磷脂/磷脂混合物作為成膜材料的三種脂質(zhì)微泡的造影開(kāi)始時(shí)間沒(méi)有顯著性差異,均在6s左右,氫化蛋黃磷脂、DSPC+DPPG(9:1)作為成膜材料的兩種種脂質(zhì)微泡的造影持續(xù)時(shí)間明顯高于DMPC+DPPG(9:1)為成膜材料的脂質(zhì)微泡的造影時(shí)間(P<0.05),DSPC+DPPG(9:1)組造影時(shí)間略高于氫化蛋黃磷脂組(P<0.05),但兩者差距不大,兩者均

8、具有良好的超聲造影效果。
　　 5、復(fù)溶性方面,兩種修飾化脂質(zhì)微泡的復(fù)溶性明顯好于空白脂質(zhì)微泡。兩種脂質(zhì)微泡之間沒(méi)有顯著性差異(p>0.05)。
　　 微泡質(zhì)量方面:肝素修飾化脂質(zhì)微泡在形態(tài)上與其余兩種微泡存在較大差異,肝素修飾化脂質(zhì)微泡有異形和聚集現(xiàn)象存在；數(shù)量也明顯低于空白微泡(p<0.01)和PEG修飾化脂質(zhì)微泡(p<0.01),空白微泡與PEG修飾化微泡在數(shù)量上沒(méi)有顯著性差異(p>0.05)；肝素修飾化脂質(zhì)微泡的

9、粒徑小于PEG修飾化脂質(zhì)微泡(p<0.05),兩種修飾化脂質(zhì)微泡與空白脂質(zhì)微泡之間沒(méi)有顯著性差異(p>0.05)。
　　 穩(wěn)定性影響因素實(shí)驗(yàn)方面:低溫(0℃)對(duì)脂質(zhì)微泡的質(zhì)量影響較大,三種微泡在5天時(shí),微泡濃度已經(jīng)明顯低于0天樣品(p<0.05),10天時(shí)降低更加明顯(PEG組p<0.05,空白組與肝素組p<0.01),且復(fù)溶后存在磷脂碎屑；常溫條件(25℃)下,三組微泡均具有良好的穩(wěn)定性,復(fù)溶性良好。相對(duì)高溫條件(40℃)下,

10、空白組與PEG組微泡濃度保持穩(wěn)定,與0天時(shí)相比沒(méi)有顯著性差異(p>0.05),肝素組微泡濃度在10天時(shí)與0天相比,微泡濃度明顯下降(p<0.05)。
　　 光照影響因素試驗(yàn)中,三組微泡在5天和10天時(shí)在復(fù)溶性、微泡濃度兩個(gè)方面,與0天相比沒(méi)有顯著性差異(p>0.05),復(fù)溶后均不存在磷脂碎屑。
　　 造影實(shí)驗(yàn)方面:PEG修飾化脂質(zhì)微泡造影效果良好,肝素修飾化脂質(zhì)微泡幾乎沒(méi)有造影效果。
　　 6、鹽酸表柔比星脂質(zhì)微

11、泡在體外和體內(nèi)均具有良好的腫瘤抑制作用,明顯高于單純用藥組。不同給藥方式之間,差異不大。
　　 結(jié)論:
　　 1、得到三種穩(wěn)定性良好的脂質(zhì)微泡的制備方法；
　　 2、得到了脂質(zhì)微泡的凍干工藝；
　　 3、低溫影響脂質(zhì)微泡的穩(wěn)定性,脂質(zhì)微泡的最佳儲(chǔ)存條件為:常溫保存,無(wú)需避光。
　　 4、以HEPC和DSPC+DPPG(9:1)為膜材料的兩種脂質(zhì)微泡具有良好的造影效果。
　　 5、得到PEG