桑寄生的遺傳毒性與胚胎發(fā)育毒性實驗研究.pdf

1、目的：探討中藥桑寄生水煎液的遺傳毒性和胚胎發(fā)育毒性及作用機制，為桑寄生的臨床安全用藥提供理論依據(jù)。 方法： 1.遺傳毒性試驗： ①急毒試驗檢測桑寄生對昆明小鼠的最大給藥量。 ②昆明孕鼠30只，隨機分為5組，6只/組：桑寄生高、中、低劑量組（40g/kg、20g/kg、10g/kg）和陰性對照組（normal sodium，NS）（0.4ml/20g）自E12天起連續(xù)灌胃5天。陽性對照組自E15天起腹腔注射

2、環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CP）（40mg/kg·d），連續(xù)2天。E16天處死各組小鼠，骨髓和胚胎肝轉(zhuǎn)移微核試驗檢測孕鼠骨髓、胎鼠肝臟中嗜多染紅細胞微核率。 ③昆明雄性小鼠30只，分組及用藥劑量同上。各組小鼠均連續(xù)用藥5天，于第一次給藥后第35d處死，精子畸形試驗檢測精子畸形率。 2.胚胎發(fā)育毒性試驗： ①急毒試驗檢測桑寄生對SD大鼠的最大給藥量。 ②SD孕鼠36只，隨機分為6組，6只/

3、組。陰性對照組（NS，2ml/200g）和桑寄生高、中、低劑量組（40g/kg、20g/kg、10g/kg）于E6～18天每天灌胃一次，陽性對照2組（a.環(huán)磷酰胺，12.5mg/kg，于E13天腹腔注射一次；b.維甲酸，100mg/kg，于E10天灌胃一次）。各組孕鼠均于E18天處死取胚胎，記錄吸收胎數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)。觀察胚胎外觀畸形發(fā)生情況，并測量胎鼠體重、身長、尾長。 ③免疫組化方法檢測胚胎腦和脊髓組織的Pax 3

4、、Cx43蛋白的表達；TUNEL法熒光標記檢測胚胎腦和脊髓組織細胞凋亡情況。 結(jié)果： 1.遺傳毒性試驗： ①桑寄生水煎液的昆明小鼠灌胃最大給藥量為80g/kg。 ②桑寄生水煎液10g/kg劑量組的胎鼠肝微核率、孕鼠骨髓微核率和雄鼠精子畸形率與陰性對照組相比，均無顯著性差異。20g/kg劑量組誘發(fā)的胚胎肝微核率較陰性對照組顯著升高（P<0.05），孕鼠骨髓微核率和雄鼠精子畸形率與陰性對照組相比，無顯著性差異

5、。而40g/kg劑量組誘發(fā)的胎鼠肝微核率、孕鼠骨髓微核率、精子畸形率均較陰性對照組顯著升高（P<0.05）。 2.胚胎發(fā)育毒性試驗： ①桑寄生水煎液的SD大鼠灌胃最大給藥量為80g/kg。 ②桑寄生水煎液10g/kg、20g/kg劑量組孕鼠的胚胎植入數(shù)、吸收胎率及死胎率與陰性對照組相比，均無顯著性差異。胎鼠體重、身長、尾長與陰性對照組相比，無顯著性差異。40g/kg劑量組孕鼠的植入胚胎數(shù)較陰性對照組顯著減少（P<

6、0.05），胎鼠體重、身長、尾長較陰性對照組顯著性減少（P<0.05），但吸收胎率與死胎率與陰性對照組無顯著性差異。三個劑量組均無外觀畸形發(fā)生。 ③桑寄生水煎液三個劑量組胚胎腦和脊髓組織切片Pax3、Cx43蛋白表達平均灰度值與陰性對照組相比，均無顯著性差異。桑寄生水煎液10g/kg、20g/kg劑量組胚胎腦和脊髓組織細胞凋亡指數(shù)與陰性對照組無顯著性差異。40g/kg劑量組凋亡指數(shù)較陰性對照組增高（P<0.05）。 結(jié)論

7、： 1.桑寄生水煎液的昆明小鼠和SD大鼠灌胃的最大給藥量均為80g/kg。 2.桑寄生水煎液在低劑量時（相當于人臨床用量33.3倍）對成年小鼠與胎鼠均無遺傳毒性，中劑量（相當于人臨床用量66.7倍）僅對胎鼠有潛在的遺傳毒性。高劑量（相當于人臨床用量133.3倍）對成年小鼠與胎鼠均有潛在的遺傳毒性。 3.桑寄生水煎液各劑量組均對大鼠胚胎無致畸作用。中、低劑量對大鼠胚胎發(fā)育無毒性作用，高劑量有胚胎毒性作用。