人足月胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離純化及生物學(xué)性狀的研究.pdf

1、目的：擬從人足月胎盤(pán)分離純化出間充質(zhì)干細(xì)胞(Mecenchymal stem cells MSCs)，進(jìn)行體外擴(kuò)增，研究其生物學(xué)性狀，并向成脂細(xì)胞分化，尋找新的間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源。方法：1、采取4種不同的消化分離方法從人足月胎盤(pán)中分離純化MSCs，胎盤(pán)組織剪碎后平均分為4組：A、胰蛋白酶+淋巴細(xì)胞分離液組；B、胰蛋白酶/膠原酶Ⅳ(1：1)+羥乙基淀粉沉淀組；C、膠原酶Ⅳ+淋巴細(xì)胞分層液分離組；D、膠原酶Ⅳ+羥乙基淀粉沉淀組，五份標(biāo)本/組。

2、2、第3代細(xì)胞經(jīng)CD44抗體、CD34抗體、CD29抗體、CD106抗體免疫熒光方法鑒定；通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及電鏡觀察其生物學(xué)性狀。3、第三代細(xì)胞采用含異丁基-甲基黃嘌呤、地塞米松、胰島素的高糖DMEM誘導(dǎo)液向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)，油紅O染色，觀察MSCs的形態(tài)變化，未誘導(dǎo)組作為平行對(duì)照。結(jié)果：1、在其他條件相同的情況下，膠原酶Ⅳ+羥乙基淀粉沉淀組培養(yǎng)成功率為100％，其余3組分別為20％，60％，80％，膠原酶IV+羥乙基淀粉沉淀組細(xì)胞出現(xiàn)伸展

3、時(shí)間及原代培養(yǎng)時(shí)間均短于其他三組。2、人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞為貼壁生長(zhǎng)的長(zhǎng)梭形成纖維樣細(xì)胞，增殖能力較強(qiáng)；強(qiáng)表達(dá)透明質(zhì)酸受體CD44和整合素家族受體CD29，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD106;3、胎盤(pán)MSCs具有向脂肪細(xì)胞分化的潛能，油紅O染色結(jié)果陽(yáng)性。結(jié)論：使用膠原酶Ⅳ消化胎盤(pán)組織，結(jié)合羥乙基淀粉沉淀法能較好地分離人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞；從人足月胎盤(pán)中成功分離出間充質(zhì)干細(xì)胞，與其他來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)性狀相似，可組為組