環(huán)氧化酶-2遺傳變異和吸煙交互作用與胰腺癌—核仁磷酸蛋白的作用.pdf

1、目的：COX—2與胰腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關，本研究探討COX—2基因啟動子區(qū)遺傳變異與胰腺癌遺傳易感性的關系及其在吸煙與胰腺癌發(fā)病中的作用。 方法：研究對象為393例胰腺癌患者和786例健康對照。COX—2啟動子區(qū)—765G/C、—1195G/A和—1290A/G基因型用PCR—限制性片段長度多態(tài)方法測定，以多因素logistic回歸分析基因型及吸煙等危險因素與胰腺癌發(fā)生風險的關系：用雙熒光素酶報告基因實驗研究不同基因型COX—2

2、啟動子在香煙濃縮物刺激時的表達活性；用凝膠電泳遷移率變動實驗和染色質免疫共沉淀實驗分析與不同等位基因結合的細胞核蛋白(轉錄因子)，并用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜鑒定其成分；用蛋白質免疫印跡實驗、細胞免疫熒光和RNA干擾實驗探討香煙濃縮物刺激時核仁磷酸蛋白(nucleophosmin，NPM)與COX—2蛋白表達之間的關系。 結果：COX—2啟動子區(qū)—1195G/A和—765G/C遺傳變異與胰腺癌發(fā)病風險相關，—1195AA

3、和—765CG基因型攜帶者發(fā)生胰腺癌風險顯著高于—1195GG和—765GG基因型攜帶者(OR=1.34；95％CI=1.12—1.60和OR=1.63；95％CI=1.25—2.10)。單體型分析結果顯示這兩個遺傳變異之間有協(xié)同作用，A_1195—C_765單體型攜帶者發(fā)生胰腺癌風險顯著高于G_1195—G_765單體型攜帶者。吸煙也是胰腺癌的危險因素(OR=1.48；95％CI=1.26—1.74)，而且與—765G/C變異存在高于

4、相乘的交互作用?！?65CG基因型的重度吸煙者患胰腺癌的OR為3.72(95％CI=1.70-8.14)，高于—765GG基因型吸煙者(OR=1.43；95％CI=1.21—1.69)和—765GC基因型不吸煙者(OR=1.44；95％CI=1.04—1.99)OR值的乘積(3.72>1.43×1.44)。報告基因實驗結果表明不同—765等位基因的基礎表達水平無統(tǒng)計學顯著差異，但在香煙濃縮物刺激后，—765C等位基因的表達高于—765G

5、等位基因。凝膠電泳遷移率變動實驗結果顯示，不同的—765等位基因結合的核蛋白不同，質譜鑒定及超遷移實驗證明與—765C等位基因結合的核蛋白為磷酸化的NPM。經(jīng)香煙濃縮物刺激后，細胞核內磷酸化NPM水平降低，結合于COX—2啟動子區(qū)的磷酸化NPM也下降，但敲降NPM表達后COX—2蛋白表達水平降低。這些結果提示，磷酸化NPM特異性結合于—765C等位基因對COX—2的表達起抑制作用，香煙濃縮物刺激后磷酸化NPM減少，從而使—765C等位基