兒童表皮葡萄球菌腦膜炎腦脊液蛋白質(zhì)組學(xué)的初步研究.pdf

1、目的：擬通過(guò)建立正常中國(guó)兒童CSF蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜，篩選表皮葡萄球菌腦膜炎(Staphylococcus epidermidis meningitis，SeM)特異性蛋白質(zhì)，為SeM的早期診斷提供線索，同時(shí)也為進(jìn)一步治療提供參考。 方法：收集SeM患兒和同年齡正常兒童CSF各4 ml，三氯乙酸(trichloracetic acid，TCA)沉淀法獲取CSF總蛋白質(zhì)，固相pH梯度(immobile pH gradient，

2、IPG)二維聚丙烯酰胺凝膠電泳(2-DE)技術(shù)分離蛋白質(zhì)，染色后，對(duì)凝膠進(jìn)行掃描獲取圖像，利用圖像分析軟件進(jìn)行比較分析，尋找兩組患兒CSF蛋白質(zhì)譜的異常變化斑點(diǎn)。篩選出5個(gè)顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，切取后進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)分析，獲得肽質(zhì)量

3、指紋圖譜(Peptide mass fingerprinting，PMF)，運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)獲取蛋白的基本信息，確定差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果：正常兒童CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點(diǎn)438個(gè)，SeM患兒CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點(diǎn)425個(gè)，其中發(fā)現(xiàn)有25個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在正常CSF表達(dá)，在SeM CSF中表達(dá)而在正常CSF中無(wú)表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)為12個(gè)；與正常CSF蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量比較，SeM有6個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量有2倍以上上調(diào)，而19個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量有2

4、倍以上下調(diào)。共選出5個(gè)差異比較明顯的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS分析，獲得了5張肽質(zhì)量指紋圖譜。軟件識(shí)別其有效肽片斷峰后查詢數(shù)據(jù)庫(kù)，搜索后匹配到蛋白質(zhì)的點(diǎn)有5個(gè)。發(fā)現(xiàn)高親和力的谷氨酸運(yùn)載體和α2-HS糖蛋白僅在SeM CSF中表達(dá)，HP蛋白在SeM CSF中表達(dá)量上調(diào)，載脂蛋白E和激肽釋放酶6在SeM CSF中表達(dá)量下調(diào)?？赡艹蔀镾eM的特異性蛋白質(zhì)分子。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功建立了正常兒童和SeM患兒CSF的雙向凝膠電泳圖