蘋果樹腐爛病初始接種體來源與病菌擴展的定量研究.pdf

1、蘋果樹腐爛病(apple tree Valsa canker)是我國各主要蘋果產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生且危害嚴重的一種真菌病害，該病害由蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)）引起。本研究首先建立了蘋果樹腐爛病菌實時熒光定量PCR檢測體系，并應(yīng)用該體系從量化的角度檢測了八棱海棠種子、八棱海棠幼苗和蘋果品種接穗攜帶蘋果樹腐爛病菌的帶菌率和帶菌量。通過人工接種和檢測，明確了蘋果樹腐爛病菌在枝條韌皮部和木質(zhì)部的擴展情況。

2、主要研究結(jié)果如下:
　　1.首次建立了蘋果樹腐爛病菌實時熒光定量PCR檢測體系:20μL反應(yīng)體系中，引物VE-F和VE-R各0.5μL，模板DNA1.0μL，含熒光染料的Mix10.0μL，ddH2O8.0μL;反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性300s，95℃變性12s，58.0℃退火12s，72℃延伸14s，40個循環(huán);羅氏Light Cycler96儀器生成的溶解曲線程序是95℃10s，65℃60s(2.20℃/s),97℃1s(0.

3、20℃/s)。
　　2.蘋果砧木八棱海棠的種子普遍攜帶蘋果樹腐爛病菌。張家口懷來、江蘇沐陽、云南麗江和河北保定4個地區(qū)生產(chǎn)的海棠種子帶菌率分別為:12.87％、44.55％、22.19％和49.01％，平均帶菌量分別為5.79×102copies/g、2.76×103copies/g、7.74×102copies/g和4.68×102copies/g。病菌集中于內(nèi)外種皮，子葉和胚芽未檢測到病菌。
　　3.海棠種子出芽后的快速

4、生長過程中，其攜帶腐爛病菌的帶菌率和帶菌量均呈現(xiàn)增長趨勢。種子、2葉苗、4葉苗和8葉苗的平均帶菌率分別為12.87％、43.33％、50.00％和60.12％，平均帶菌量為5.79×102copies/g、8.82×103copies/g、5.88×104copies/g和1.39×105copies/g。8葉期后，海棠苗中腐爛病菌含量穩(wěn)定在1.30×105copies/g左右。
　　4.發(fā)生腐爛病的果樹果實中的蘋果種子與健康果樹

5、上的蘋果種子相比，攜帶蘋果樹腐爛病菌情況存在顯著性差異。病樹果實種子的平均帶菌率為10.00％，平均帶菌量為2.0×102copies/粒，而健康蘋果樹的果實種子中未檢測到腐爛病菌。
　　5.河北蠡縣接穗圃的富士接穗韌皮部和木質(zhì)部中蘋果樹腐爛病菌的平均帶菌率分別為68.88％和76.67％，平均帶菌量分別為3.14×104copies/g和6.28×104copies/g。
　　6.室溫（約18℃）條件下人工接種蘋果樹腐爛病

6、菌于40根3年生蘋果枝條，接種21d后，韌皮部病斑向枝條端部和基部擴展的平均距離分別為6.31cm和4.53cm，而病菌的平均擴展距離分別為13.0cm和14.3cm;木質(zhì)部褐變組織向枝條端部和基部擴展的平均距離分別為11.33cm和12.33cm，病菌的平均擴展距離分別為13.33cm和16.33cm。病菌在韌皮部和木質(zhì)部的擴展距離顯著大于其病斑的擴展距離;木質(zhì)部褐變組織的擴展距離顯著大于韌皮部病斑的擴展距離;病健交界處發(fā)病部位與未發(fā)