eIF4E促進(jìn)鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移及其對(duì)順鉑抗癌作用的影響.pdf

1、目的：⑴觀察eIF4E與Snail在鼻咽癌組織中的表達(dá)關(guān)系。⑵明確eIF4E在鼻咽癌細(xì)胞CNE-2中對(duì)Snail mRNA和蛋白表達(dá)的調(diào)控。⑶觀察eIF4E對(duì)CNE-2細(xì)胞侵襲能力的影響及其分子機(jī)制的初步探討，并嘗試以eIF4E為靶點(diǎn)干預(yù)鼻咽癌細(xì)胞的侵襲活性。
　　 方法：①免疫組織化學(xué)方法觀察34例鼻咽粘膜慢性炎，65例鼻咽癌病例標(biāo)本中eIF4E的表達(dá)情況;33例鼻咽粘膜慢性炎，67例鼻咽癌病例標(biāo)本Snail的表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)分

2、析eIF4E與Snail表達(dá)情況的相關(guān)性。②穩(wěn)定敲減或瞬時(shí)轉(zhuǎn)染eIF4E表達(dá)質(zhì)粒后，用RT-PCR或Real-time QuantitativeRT-PCR、Western Blot分別檢測(cè)CNE-2細(xì)胞中的eIF4E和Snail的mRNA和蛋白水平。③敲減eIF4E后，Transwell小室觀察CNE-2細(xì)胞的侵襲活性;在eIF4E高表達(dá)狀態(tài)下，小片段RNAi敲減Snail后觀察CNE-2細(xì)胞侵襲活性的改變。聯(lián)合敲減eIF4E和施加順

3、鉑處理，采用Transwell小室觀察CNE-2細(xì)胞的侵襲活性的改變。
　　 結(jié)果：⑴在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌中，eIF4E的陽(yáng)性表達(dá)率分別是11.76％(4/34)、71.87％(23/32)、93.94％(31/33); Snail的陽(yáng)性表達(dá)率分別為15.15％(5/33)、58.80％(20/34)與84.80％(28/33)。在鼻咽原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌組標(biāo)本中eIF4E與Snail的表達(dá)呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是0.

4、87（P＜0.05），0.66(P＜0.05)。⑵在CNE-2細(xì)胞中eIF4E對(duì)Snail的mRNA和蛋白的影響：與空載對(duì)照組比較，穩(wěn)定沉默eIF4E的CNE-2細(xì)胞（課題組先前己成功構(gòu)建，命名為CNE2-EP細(xì)胞）中:eIF4E mRNA表達(dá)下降80.89％(P＜0.05)，Snail mRNA表達(dá)水平下調(diào)60.40％(P＜0.05); eIF4E蛋白下調(diào)72.69％（P＜0.05），Snail蛋白下調(diào)47.95％(P＜0.05)；經(jīng)

5、基因測(cè)序圖譜鑒定，成功構(gòu)建eIF4E表達(dá)質(zhì)粒;經(jīng)熒光顯微鏡觀察，eIF4E表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CNE-2細(xì)胞在培養(yǎng)48h后轉(zhuǎn)染效率較高。在瞬時(shí)過(guò)表達(dá)eIF4E CNE-2細(xì)胞（命名為CNE2-OE細(xì)胞）中:eIF4E mRNA表達(dá)增加191％(P＜0.05)，Snail mRNA的表達(dá)增加99.25％(P＜0.05); eIF4E外源性蛋白顯著陽(yáng)性，Snail蛋白表達(dá)增加106％(P＜0.05)。⑶eIF4E對(duì)CNE-2細(xì)胞侵襲活性的影響：

6、與對(duì)照組比較，敲減eIF4E的CNE-2細(xì)胞侵襲活性下降約為41.26％(P＜0.05)；與對(duì)照組比較，過(guò)表達(dá)eIF4E的CNE-2細(xì)胞侵襲活性增加37.88％(P＜0.05)；與對(duì)照組相比，在過(guò)表達(dá)eIF4E的CNE-2細(xì)胞中，敲減Snail后，細(xì)胞侵襲活性下降60.59％(P＜0.05)；與對(duì)照組比較，單純順鉑處理對(duì)CNE-2細(xì)胞的侵襲活性下降約50.07％(P＜0.05)；與單純順鉑處理組比較，聯(lián)合敲減eIF4E和順鉑處理后，CN

7、E-2細(xì)胞侵襲活性下調(diào)約22.56％(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：①eIF4E和Snail在鼻咽粘膜慢性炎組織、鼻咽原發(fā)癌與轉(zhuǎn)移癌中的表達(dá)均呈逐漸升高的趨勢(shì)且兩者呈高度正相關(guān)，提示eIF4E和Snail的過(guò)度表達(dá)可能是促進(jìn)鼻咽癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的重要因素之一，而且兩者之間可能存在協(xié)作或促進(jìn)關(guān)系。②eIF4E顯著提高Snail mRNA和蛋白水平，提示eIF4E促進(jìn)Snail的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。③eIF4E增強(qiáng)Snail的轉(zhuǎn)錄促進(jìn)鼻咽癌的侵襲轉(zhuǎn)