去細胞豬主動脈瓣RGD表面修飾促進細胞粘附的實驗研究.pdf

1、對于心臟瓣膜疾病最為主要的治療方式仍是手術(shù)進行瓣膜置換。目前臨床應用的人工心臟瓣膜有機械瓣和生物瓣兩大類，盡管均能改善和延長患者的生命，但都未達到理想程度。機械瓣需要終生抗凝，有一定的栓塞和出血率；生物瓣則存在衰壞、鈣化的問題。同種瓣膜雖優(yōu)于異種生物瓣，但來源受限，并且也存在衰敗的問題。研究與開發(fā)組織工程心臟瓣膜是當前大勢所趨。
　　利用去細胞瓣構(gòu)建組織工程心臟瓣膜，具有任何高分子可降解材料無法替代的優(yōu)越性。但是由于在支架材料的去

2、細胞過程中，會同時去除大量細胞外可溶性基質(zhì)，其中包括已知的調(diào)控細胞粘附的蛋白分子。因此在利用去細胞瓣構(gòu)建組織工程心臟瓣膜時，如何調(diào)控、促進種子細胞的粘附、增殖和ECM新生，是丞待解決的重要問題。借鑒目前對于“生物惰性材料”通過“表面修飾”的方式，可以改善或提高其生物相容性、材料的理化性能的成功經(jīng)驗，擬對去細胞瓣進行表面修飾，以改善其理化性能、促進種子細胞的粘附、增殖和分化。生物活性分子RGD肽（精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸）作為天然ECM重

3、要組成，是目前應用最廣、最有效的促進細胞粘附的多肽。
　　本研究首先通過應用我們實驗室篩選的，胰蛋白酶+TritonX-100法制備去細胞豬主動脈瓣支架，并對本實驗室篩選的交聯(lián)劑－環(huán)氧氯丙烷處理去細胞瓣膜支架材料的影響進行進一步的對比研究。在此基礎(chǔ)上，應用多肽（序列為YGRGDSP酪氨酸－甘氨酸－精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸－絲氨酸－脯氨酸）與環(huán)氧氯丙烷聯(lián)合對去細胞豬主動脈瓣膜進行表面修飾，并研究處理后材料細胞粘附性的變化。對去細胞支

4、架材料的改良，以及通過交聯(lián)RGD進行表面修飾做了初步的嘗試。
　　第一部分去細胞豬主動脈瓣膜的制備及環(huán)氧氯丙烷改性后的理化性能實驗。采用胰蛋白酶消化和高滲、低滲性去垢劑TritonX-100漂洗的方法制備去細胞豬主動脈瓣，分別用GA、EC以及GA+EC（GE）的方法處理去細胞豬主動脈瓣，比較相互之間力學、組織穩(wěn)定性、組織相容性上的差異。
　　結(jié)果：
　　1、采用胰酶+TritonX-100法能完全脫除豬主動脈瓣膜的細胞

5、成分。
　　2、GA、EC以及GE三種處理方法，均可使APAV在力學、熱皺縮溫度、體外抗酶解能力上得到加強，并且其中以GE效果最佳。
　　3、動物皮下包埋、血漿蛋白及血小板粘附實驗結(jié)果表明，EC處理不改變APAV的組織相容性和血液相容性，同時經(jīng)EC處理的GA組APAV，顯著的降低GA的生物毒性，其組織相容性、血液相容性明顯優(yōu)于GA處理組。
　　結(jié)論：本實驗提示GE處理APAV，能夠明顯改善APAV理化性質(zhì)，降低GA的生

6、物毒性，有利于提高組織相和血液相容性。
　　第二部分環(huán)氧氯丙烷聯(lián)合RGD對去細胞豬主動脈瓣修飾的實驗研究。
　　目的：研究含RGD肽表面修飾的去細胞瓣對細胞粘附性的影響。
　　方法：各不同處理去細胞瓣組與YGRGDSP肽反應，通過茚三酮法、熒光標記顯示法比較各組的結(jié)合率。種植大鼠主動脈MFBs，沉淀法檢測細胞粘附率。
　　結(jié)果：茚三酮、熒光顯像法各組對比顯示多肽可很好的交聯(lián)到EC、GE組，最佳反應條件為：室溫，1