蛋白質(zhì)硝化及抑制評價體系的建立.pdf

1、過氧亞硝酸(ONOO-)是細胞內(nèi)一種重要的活性氧物種，在體內(nèi)一旦生成，就會對蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等生物大分子造成氧化損傷。其中，蛋白質(zhì)硝基化是過氧亞硝酸在體內(nèi)損傷的主要途徑，其產(chǎn)物3-硝基酪氨酸(3-NT)是目前公認的體內(nèi)損傷標志物，在多種病變組織中都檢測到了它的存在。所以建立蛋白質(zhì)硝化及抑制評價體系具有重要的研究意義。
　　 本文以牛血清白蛋白為硝化底物、過氧亞硝酸為硝化試劑，以褪黑素為硝化抑制劑建立了蛋白質(zhì)硝化及抑制評價體系

2、。在此基礎(chǔ)上，選用多酚類化合物蘆丁和原花青素作為硝化抑制劑對體系進行了驗證。最后，以SD糖尿病大鼠為動物模型，探討了褪黑素對糖尿病的防治及對腎臟的保護作用。
　　 實驗結(jié)果表明，在37℃、pH7.2的PBS介質(zhì)中反應90min，且牛血清白蛋白與過氧亞硝酸的濃度比為1:18時，硝基化反應進行的比較完全。在該實驗條件下，在反應體系中引入褪黑素、蘆丁和原花青素。結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種抗氧化劑都能一定程度地抑制硝基化反應，同濃度下，抑制能力依次為

3、：褪黑素＞原花青素＞蘆丁，最大抑制率分別為：80.7％，66.9[％]，38.7[％]。初步的抑制機理研究表明，三種抗氧化劑抑制硝化反應的機理是清除自由基而非還原硝化產(chǎn)物。
　　 動物實驗結(jié)果表明，造模成功后，糖尿病大鼠的腎臟出現(xiàn)損傷。經(jīng)過褪黑素治療后，臟器系數(shù)降低，糖尿病癥狀有所減輕。在組織和血清中，干預組(DM＋M)大鼠的NO2-+NO3-含量和MDA含量均明顯低于糖尿病組(DM)，說明褪黑素能抑制糖尿病的氧化應激反應，有緩