中藥化合物組的一維和二維液相色譜指紋圖譜方法學(xué)研究.pdf

1、近年來，隨著儀器分析技術(shù)、檢測(cè)手段及計(jì)算機(jī)信息處理技術(shù)的迅速發(fā)展，中藥指紋圖譜技術(shù)也得到了飛速的發(fā)展，大大加快了傳統(tǒng)中藥現(xiàn)代化和國(guó)際化的進(jìn)程。但是，目前中藥指紋圖譜的發(fā)展中仍存在許多局限：1）中藥指紋圖譜與化學(xué)成分的相關(guān)性；2）中藥指紋圖譜與其藥理作用的相關(guān)性；3）中藥指紋圖譜本身的可靠性和準(zhǔn)確性。這些已成為了制約中藥指紋圖譜發(fā)展的新的瓶頸。針對(duì)上述現(xiàn)象，本課題以中藥五味子和虎杖作為研究對(duì)象，采用高效液相色譜法和全二維液相色譜法，分別建

2、立一維指紋圖譜和基于生物膜色譜柱的全二維液相色譜指紋圖譜，并對(duì)所建立的指紋圖譜進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證和效果評(píng)價(jià)，該研究成果可以有效地為中藥質(zhì)量控制現(xiàn)代化研究提供方法的模板和技術(shù)的平臺(tái)。
　　 第一部分：以傳統(tǒng)中藥五味子和虎杖為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行一維化學(xué)指紋圖譜的研究
　　 1.五味子藥材一維液相色譜指紋圖譜的研究
　　 通過優(yōu)化色譜條件，建立了同時(shí)適合北五味子和南五味子指紋圖譜研究的分析方法，通過指紋圖譜的方法學(xué)驗(yàn)

3、證和耐用性實(shí)驗(yàn)，證明了所建立的分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性。對(duì)所得到的北五味子和南五味子的指紋圖譜分別進(jìn)行色譜峰匹配，確定各自的共有峰，生成對(duì)照指紋圖譜，并對(duì)指紋圖譜進(jìn)行了相似度評(píng)價(jià)。并用主成分分析和聚類分析對(duì)指紋圖譜進(jìn)行了效果評(píng)價(jià)，結(jié)果證明，所獲得的指紋圖譜信息能準(zhǔn)確地區(qū)分南北五味子，并且能有效地對(duì)五味子藥材進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　 2.虎杖藥材一維液相色譜指紋圖譜的研究
　　 采用響應(yīng)面方法對(duì)虎杖藥材提取條件進(jìn)行了體統(tǒng)的優(yōu)化

4、，對(duì)不同來源的虎杖藥材進(jìn)行分離分析，建立了能有效表征其質(zhì)量信息的指紋圖譜。對(duì)所建立的指紋圖譜進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，并采用相似度評(píng)價(jià)，聚類分析和主成分分析對(duì)所得到的指紋圖譜信息進(jìn)行了進(jìn)一步的效果評(píng)價(jià)。結(jié)果證明，所獲得的指紋圖譜信息能為虎杖藥材的質(zhì)量控制與藥材地道性研究提供依據(jù)。
　　 第二部分：基于生物膜色譜柱的中藥北五味子和虎杖藥材全二維液相色譜指紋圖譜的研究
　　 1.基于脂質(zhì)體柱的中藥北五味子全二維液相色譜指紋圖譜的研究

5、
　　 采用日本島津高效液相系統(tǒng)和軟件自動(dòng)控制的十通閥，成功搭建了全二維液相色譜儀。通過對(duì)各種不同色譜分離模式耦聯(lián)的二維體系進(jìn)行選擇和優(yōu)化后，最終，第一維選用能夠模擬藥物與生物膜的相互作用的脂質(zhì)體柱，第二維選用整體柱，采用該全二維系統(tǒng)對(duì)不同來源的中藥北五味子進(jìn)行了研究。通過相關(guān)軟件的處理和轉(zhuǎn)化，首次建立了北五味子二維等高圖和三維立體圖，在分離了30多種化合物的同時(shí)，利用保留時(shí)間，DAD和MS信息對(duì)其中的14種化合物進(jìn)行了初步的結(jié)

6、構(gòu)鑒定。對(duì)得到的三維立體指紋圖譜運(yùn)用聚類分析和主成分分析進(jìn)行效果評(píng)價(jià)研究。并采用油水分配系數(shù)法對(duì)脂質(zhì)體柱模擬藥物細(xì)胞通透性的效果做了進(jìn)一步的探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了全二維液相分離模式在復(fù)雜樣品體系組份分析中的優(yōu)勢(shì)及其模擬藥物透膜吸收的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
　　 2.基于人血清白蛋白柱的中藥虎杖全二維液相色譜指紋圖譜的建立及其在生物樣品分離分析中的初步應(yīng)用
　　 以中藥虎杖為研究對(duì)象，在上一章儀器搭建的基礎(chǔ)上，第一維選用能模擬藥物與

7、蛋白結(jié)合情況的人血清白蛋白柱，第二維選用具有快速分離能力的整體柱，通過全二維液相色譜條件的優(yōu)化，建立了適合虎杖分離分析的全二維液相色譜分析體系。所得到的三維立體指紋圖譜和二維等高指紋圖譜中既包含了中藥化學(xué)成分信息又包含了虎杖藥材中的有效成分與白蛋白結(jié)合的信息。利用保留時(shí)間，紫外光譜和質(zhì)譜信息對(duì)其中的9種化合物進(jìn)行了初步的結(jié)構(gòu)鑒定。并將全二維液相色譜技術(shù)成功運(yùn)用于虎杖體內(nèi)樣品的分析研究，對(duì)比格犬口服虎杖藥材提取物后的入血成分進(jìn)行了初步的研