燕窩蛋白二維液相色譜分離方法的研究.pdf

1、本文建立了燕窩蛋白的分步提取方法，構(gòu)建了離線SCX×RP二維液相色譜系統(tǒng)，有效的分離了燕窩中蛋白質(zhì)提取物。
　　 通過比較其它四種方法，選定了燕窩蛋白的最適提取方法為分步提取法。利用單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化得到分步提取的最佳條件為：燕窩樣品經(jīng)1:40料液比溶解，60℃，超聲40 min，離心，收集上清液，殘?jiān)貜?fù)提取一次，合并兩次上清液，固體殘?jiān)僖来斡孟鄳?yīng)濃度的NaCl、NaOH和HCl溶液以上述方法提取，上清液分別在去離子水

2、中透析48 h，然后將透析液合并進(jìn)行冷凍干燥，從而得到燕窩蛋白粗品。
　　 測定了四種燕窩樣品提取液中的糖含量約為3％，蛋白質(zhì)提取率約為6％，約為常見提取方法的2倍。凝膠電泳實(shí)驗(yàn)表明所提取的蛋白質(zhì)分子量在35－116 kDa的范圍內(nèi)，并掃描了各個(gè)樣品的紫外吸收光譜。
　　 本文針對(duì)四種燕窩蛋白樣品進(jìn)行了一維的離子交換色譜(SCX)和反相色譜(RP)分析，結(jié)果表明兩種分析方法都不能達(dá)到很好的分離效果。在此一維分析的基礎(chǔ)上，

3、本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了SCX×RP的離線二維液相系統(tǒng)。系統(tǒng)中第一維采用SCX色譜，30 min內(nèi)鹽濃度由0線性增加至100％，每5 min對(duì)樣品組分進(jìn)行一次切割，共6次切割，在第一維和第二維之間以組分收集器收集第一維洗脫的樣品組分。收集的組分經(jīng)過凍干處理，復(fù)溶后逐一導(dǎo)入第二維RP色譜中，40 min內(nèi)乙腈濃度由0線性增加至100％。整個(gè)二維系統(tǒng)的出峰數(shù)量和系統(tǒng)分辨率都比一維的單個(gè)分離大大增加，達(dá)到了很好的分離效果。
　　 利用本文所構(gòu)建的