人SDF-1α的原核表達(dá)、純化及其促進(jìn)雷帕霉素洗脫支架植入后血管再內(nèi)皮化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF-1）在特異性受體CXCR4介導(dǎo)下參與機(jī)體多種生理和病理過程，尤其在干／祖細(xì)胞動員、遷移、募集和歸巢等方面發(fā)揮重要作用。內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)是一類能循環(huán)、增殖并可直接分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞。在胚胎發(fā)育過程中其參與血管發(fā)生，出生后還具有促進(jìn)新生血管形成和內(nèi)皮損傷后修復(fù)等作用。EPCs表面高表達(dá)SDF-1特異受體CXCR4，因此增強(qiáng)SDF-1/CXCR4軸可有效提高循環(huán)中EPCs數(shù)量并改善其功能。本研究擬制

2、備hSDF-1α，研究其對藥物支架植入后靶血管再內(nèi)皮化的作用。 利用分子克隆技術(shù)，構(gòu)建hSDF-1α原核表達(dá)載體，應(yīng)用離子交換層析蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化載體表達(dá)蛋白，得到高純度目的蛋白，采用T淋巴細(xì)胞體外趨化實(shí)驗(yàn)和顯色基質(zhì)鱟試劑盒分別對純化得到的目的蛋白生物學(xué)活性和內(nèi)毒素含量進(jìn)行檢測。將合格的蛋白應(yīng)用于動物體內(nèi)，評價(jià)其系統(tǒng)給藥對于雷帕霉素洗脫支架（SES）植入兔腹主動脈后靶血管再內(nèi)皮化（re-endothelialization）的

3、效果。 本研究主要結(jié)果如下：（1）BSA蛋白定量法測定目的蛋白濃度最高為1.7mg/mL，BandScan 5.0軟件分析SDS-PAGE電泳結(jié)果表明重組蛋白純度大于99％，2L初始菌液獲得了20mg的重組蛋白。趨化實(shí)驗(yàn)顯示蛋白具有生物學(xué)活性，且檢測內(nèi)毒素含量為0.02EU/ug。（2）國產(chǎn)SES和BMS植入后血管再內(nèi)皮化的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)SES植入后靶血管出現(xiàn)明顯的再內(nèi)皮化延遲。(3)將重組蛋白作用于植入SES的實(shí)驗(yàn)動物后發(fā)現(xiàn)，術(shù)

4、后第7天、14天和28天試驗(yàn)組內(nèi)皮覆蓋程度明顯高于對照組(分別為45％±15％比23％±7％；75％±7％比57％±3％和 84％±7％比68％±4％)。28天時(shí)試驗(yàn)組新生內(nèi)膜面積和厚度以及管腔狹窄率較對照組均明顯減少。 以上的實(shí)驗(yàn)和研究，不僅改進(jìn)hSDF-1α蛋白制備流程，明顯提高蛋白制備的效率，而且在動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明了hSDF-1α蛋白可有效促進(jìn)SES植入術(shù)后靶血管再內(nèi)皮化過程，同時(shí)可顯著減輕支架植入后血管內(nèi)膜增生。一方面為