微型中空纖維反應(yīng)器用于藥物肝毒性研究.pdf

1、隨著大量新藥的發(fā)明,亟需各種有效的模型來(lái)評(píng)價(jià)藥物的肝毒性。傳統(tǒng)的動(dòng)物模型有時(shí)間長(zhǎng)、操作繁瑣與費(fèi)用高的缺點(diǎn),不適用于藥物肝毒性的高通量篩選。近來(lái),各種體外藥物代謝模型受到了廣泛關(guān)注,在藥物肝毒性研究中,大多采用規(guī)模趨向微型化的多孔板原代肝細(xì)胞培養(yǎng)法。但多孔板培養(yǎng)細(xì)胞不能長(zhǎng)期保持肝細(xì)胞特異功能,這制約了原代肝細(xì)胞模型在藥物研究中的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)的目的在于尋找新的適合藥物肝毒性研究的原代肝細(xì)胞模型,希望能代替多孔板培養(yǎng)法應(yīng)用于藥物肝毒性的研究中

2、。本文分五個(gè)部分。第一部分綜述了與肝毒性相關(guān)的新藥篩選現(xiàn)狀和存在的問(wèn)題,以及肝細(xì)胞體外培養(yǎng)的研究進(jìn)展。并提出了本文的研究思路:將大型的生物人工肝反應(yīng)器微型化,建立一種細(xì)胞三維培養(yǎng)的微型反應(yīng)器,用于體外藥物肝毒性的研究。第二部分通過(guò)一系列定性和定量實(shí)驗(yàn)尋找合適的材料構(gòu)建微型反應(yīng)器。得到了一種由100KDa聚砜中空纖維絲,透氣硅膠管,硅膠塞構(gòu)成的微型反應(yīng)器,并以鼠尾膠原為包埋基質(zhì)將細(xì)胞培養(yǎng)于中空纖維絲腔內(nèi)。包埋于此種反應(yīng)器內(nèi)的大鼠肝細(xì)胞能存

3、活14天以上,而且能較好保持肝細(xì)胞功能和CYP450活性。第三部分主要評(píng)價(jià)微型反應(yīng)器用于藥物肝毒性研究的可行性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)微型中空纖維反應(yīng)器對(duì)不同濃度(2.5-20 mmol/L)醋氨酚毒性的敏感性均高于單層培養(yǎng)方式,并更接近體內(nèi)藥物毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,說(shuō)明此種培養(yǎng)方式能較好保持CYP450酶活性并能模擬體內(nèi)微環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)還采用低濃度的利福平(10 mg/L)和異煙肼(15 mg/L)考察了微型中空纖維反應(yīng)器用于藥物低劑量長(zhǎng)期肝毒性研究的可行

4、性,發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)中空纖維反應(yīng)器包埋細(xì)胞的肝毒性在用藥3天后才能觀察到,而單層貼壁細(xì)胞在5天的培養(yǎng)中未發(fā)現(xiàn)有明顯的藥物肝毒性。第四部分討論了微型中空纖維反應(yīng)器作為體外保肝藥物模型的可行性。實(shí)驗(yàn)選用醋氨酚作為肝毒性藥物,谷胱甘肽作為保肝藥物,結(jié)果發(fā)現(xiàn),對(duì)于單層貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,谷胱甘肽的保護(hù)作用在加藥24h后開(kāi)始下降,而對(duì)于微型中空纖維反應(yīng)器包埋細(xì)胞,谷胱甘肽的保護(hù)作用能持續(xù)5天。該結(jié)果預(yù)示,微型中空纖維反浙江大學(xué)碩士論文應(yīng)器能更好保持與GSH