同地域醫(yī)院與社區(qū)分離MRSA在分子流行病學(xué)上的特點分析比較.pdf

1、金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)是前醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌之一。自從1961年英國學(xué)者Jevons首次報道甲氧西林耐藥性金黃色葡萄球菌(methicillin resistaxtt staphylococcus aureus,MRSA)以來,MRSA已成為全球不容忽視的嚴(yán)重問題,并且在世界范圍內(nèi)迅速擴(kuò)散?，F(xiàn)在,世界各地有關(guān)MRSA流行的研究報道層出不窮且逐年增加。伴隨著臨床上各類抗生素的開發(fā)和廣泛應(yīng)用,

2、MRSA不僅表現(xiàn)為對絕大多數(shù)的β內(nèi)酰胺酶類抗生素具有高度耐藥性,而且對其它抗生素如氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可霉素類、四壞素類及喹諾酮類等多種抗生素產(chǎn)生耐藥,所致的感染癥更加難于治療,成為臨床感染監(jiān)控中的一大難題。
　　 另外,MRSA不僅更加頻繁地從醫(yī)院環(huán)境中分離出來,進(jìn)入二十世紀(jì)90年代以后,在英國、加拿大等多個國家都有從正常健康人群中分離出MRSA的報道,這些MRSA稱為社區(qū)獲得性MRSA(community-associ

3、ated MRSA,CA-MRSA),與之相對應(yīng)的醫(yī)院分離MRSA稱為院內(nèi)感染MRSA(hospital-associated MRSA,HA-MRSA)。雖然CA-MRSA與HA-MRSA在細(xì)菌克隆起源,對β-內(nèi)酰胺酶類抗生素耐藥性,及易感人群上存在明顯差別,但是有關(guān)CA-MRSA感染流行特征的研究表明,當(dāng)社區(qū)中攜帶或感染MRSA水平增加時,CA-MRSA可通過多種途徑潛入醫(yī)院而引起院內(nèi)MRSA感染的暴發(fā)流行;而同樣,當(dāng)攜帶MRSA的

4、患者未經(jīng)徹底除菌而與社區(qū)接觸時,也會使得多重耐藥的HA-MRSA在社區(qū)人群中引起嚴(yán)重感染。因此,了解MRSA的流行特性與變化趨勢在控制MRSA在醫(yī)院及社區(qū)的雙重流行有其重要的臨床意義。
　　 方法：
　　 1.收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院臨床患者分離的院內(nèi)感染金葡菌180株和社區(qū)來源金葡菌52株;
　　 2.結(jié)合頭孢西丁紙片擴(kuò)散法和PCR檢測mecA基因的方法確定MRSA與MSSA;
　　 3.統(tǒng)計收集菌

5、株對臨床上8種抗菌素類藥物的敏感性;
　　 4.采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對107株HA-MRSA、22株CA-MRSA的大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥基因ermA,ermB,ermC、四環(huán)素類抗菌藥物的耐藥基因tetM,tetK,tetL,tetO、氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥基因aac(6')/aph(2")、aph(3')-Ⅲ、ant(4)和殺白細(xì)胞毒素(PVL)基因進(jìn)行檢測;
　　 5.多重PCR方法對SCCmec基因島進(jìn)行分

6、型和菌株spa分型,PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳紫外成像后進(jìn)行分析;
　　 6.脈沖場凝膠電泳(PFGE)對相關(guān)菌株進(jìn)行同源性分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.應(yīng)用PCR方法對收集菌株進(jìn)行mecA基因的檢測,醫(yī)院分離金葡菌中107株(107/180,59.4%)為陽性,社區(qū)分離菌中22株(22/52,42.3%)為陽性。
　　 2.藥物敏感試驗顯示,在107株HA-MRSA中,對檢測的8種抗菌藥物的耐藥性超過

7、50.0%的抗生素達(dá)7種;在22株CA-MRSA中,耐藥性超過50.0%的抗生素達(dá)5種。其中,對青霉素、苯唑西林和頭孢西丁的耐藥菌株比例最高,均達(dá)到95%以上。醫(yī)院分離的MRSA菌株中敏感性達(dá)50.0%以上的抗生素有1種,而社區(qū)分離MRSA菌株中敏感性達(dá)50.0%以上的抗生素有3種,尤其對萬古霉素的敏感性最高,敏感率達(dá)到100.0%。
　　 3.107株HA-MRSA中有66株(61.7%)ermA基因陽性,19株(17.8%)

8、ermB基因陽性,49株(45.8%)ermC基因陽性,同時檢出三種耐藥基因的有19株(17.8%)。22株CA-MRSA中有13株(59.1%)檢測到ermA基因陽性,未檢出ermB和ermC基因。
　　 4.107株HA-MRSA中有101株(94.4%)檢測到tetM基因陽性,52株(48.6%)tetK基因陽性,11株(10.3%)tetL基因陽性,17株(15.9%)tetO基因陽性,同時檢出tetMKL三個基因的6株

9、(5.6%)。22株CA-MRSA中有8株(36.4%)檢測到tetM基因陽性,并且只檢測出這一種基因。
　　 5.107株HA-MRSA中有101株(94.40/0)檢測到aac(6')-aph(2")基因陽性,6株(5.6%)aph(3')基因陽性,未檢測到ant(4')基因陽性的菌株。22株CA-MRSA中有10株(45.5%)檢測到aac(6')-aph(2")基因陽性,2株(9.1%)ant(4')基因陽性。
　

10、　 6.107株HA-MRSA中PVL陽性的19株(17.8%),22株CA-MRSA中PVL陽性的10株(45.5%)。
　　 7.對129株進(jìn)行SCCmec基因島分型實驗,共檢出5個SCCmec型別。在107株醫(yī)院分離的MRSA菌株中檢到Ⅰ型11株00.3%),Ⅱ型47株(43.9%),Ⅲ型30株(28.0%),Ⅴ型14株(13.1%),還有5株未能分型。22株社區(qū)分離的MRSA菌株中檢到Ⅳ型15株(68.2%),Ⅴ型6株

11、(27.3%),還有1株未能分型。說明本地區(qū)主要以Ⅱ型和Ⅳ型為主要流行株。
　　 8.對測序結(jié)果進(jìn)行比對分析,依據(jù)spa分型數(shù)據(jù)庫分型。107株HA-MRSA中t570型41株、t030型32株、t645型9株、t002型4株、t2793型7株、t287型3株、t2310型3株、t287型2株、t2094型2株、t571型2株、t2592型2株,22株CA-MRSA中t570型19株、t030型3株;t570型和t030型是社區(qū)

12、和醫(yī)院MRSA的主要流行spa型別。
　　 9.對129株菌株進(jìn)行了PFGE電泳技術(shù),共有A-G7種類型,以A型為主。107株HA-MRSA中A型47株、B型36株、C型12株、D型4株、E型2株、F型2株、G型4株;22株CA-MRSA中A型19株、B型3株;見圖10。
　　 結(jié)論：
　　 1.對HA-MRSA和CA-MRSA表型和基因型進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示CA-MRSA對多種非β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的敏感性顯著高

13、于HA-MRSA,HA-MRSA呈現(xiàn)出多重耐藥。
　　 2.本實驗中,HA-MRSA中PVL陽性率為17.8%,CA-MRSA中PVL陽性率為45.5%。醫(yī)院分離的MRSA中也出現(xiàn)了PVL陽性的菌株,應(yīng)引起我們足夠的重視。
　　 3.通常Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的SCCmec存在于HA-MRSA中,Ⅳ和Ⅴ型SCCmec基因盒主要存在于CA-MRSA中。但在本實驗中,HA-MRSA分離的菌株中也檢測到Ⅴ型SCCmec基因島,說明v型S