脆性組氨酸三聯(lián)體（FHIT）在皮膚良惡性腫瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：鱗狀細(xì)胞癌(squamouscellcarcinoma,SCC)、Bowen病(Bowen'sdisease，BOD)、光線性角化病(actinickeratosis，AK)是常見(jiàn)的非黑素瘤皮膚腫瘤(non-melanomaskincancers，NMSC)。這些皮膚腫瘤的病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明。目前研究表明，皮膚腫瘤的發(fā)病與紫外線照射、人類乳頭瘤病毒(HPV)感染，癌基因、抑癌基因等多種因素有關(guān)。大部分皮膚癌是因暴露于環(huán)境中

2、的日光所引起的，淺膚色或DNA修復(fù)功能低下是目光誘發(fā)皮膚癌的遺傳易感性因素。脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)基因是1996年Ohta等利用差異顯示分析探針和外顯捕獲法于人3號(hào)染色體短臂(3p14.2)處發(fā)現(xiàn)的一個(gè)抑癌基因，此基因跨越人類染色體的脆性部位FRA3B，其缺失與許多腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。另有研究認(rèn)為FHIT缺失可能與環(huán)境條件有聯(lián)系。鑒于皮膚腫瘤與FHIT缺失均與環(huán)境條件密切相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)SCC、BOD、AK及正常皮膚中的FHIT基

3、因蛋白進(jìn)行檢測(cè)，以探討FHIT基因在皮膚腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，為皮膚腫瘤的基因治療提供一種新的思路。 方法：皮膚良惡性腫瘤患者皮損標(biāo)本來(lái)源于1999年6月～2005年6月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院及哈勵(lì)遜國(guó)際和平醫(yī)院皮膚科門(mén)診患者，共計(jì)68例。均經(jīng)組織病理確診。其中鱗狀細(xì)胞癌20例，男11例，女9例，年齡38～90歲，平均(58.2±13.6)歲，病程平均3.9年。鮑溫病16例，男8例，女8例，年齡45～80歲，平均(63.3±8.

4、1)歲，病程平均6.1年。光線性角化病16例，男9例，女7例，年齡38～70歲，平均(58.4±8.5)歲，病程平均3.0年。所有患者均無(wú)其他系統(tǒng)性疾病。取患者皮損組織用于常規(guī)病理分析，并用免疫組化法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)皮損中FHIT的表達(dá)水平，同時(shí)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)皮損中細(xì)胞周期、DNA含量及倍體。選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外科16例外傷手術(shù)患者的健康皮膚作為正常對(duì)照，且年齡、性別及取材部位與實(shí)驗(yàn)組患者相匹配。 組織病理采用石蠟切片H

5、E染色觀察；免疫組化采用SP法。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件中多個(gè)樣本比較的Kruskal-wallisH秩和檢驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件中方差分析及線性相關(guān)分析。 結(jié)果：常規(guī)組織病理檢查：SCC組：表現(xiàn)為不規(guī)則的鱗狀細(xì)胞團(tuán)向下增生，突破基底膜并侵入真皮。腫瘤團(tuán)塊主要由分化好的鱗狀細(xì)胞組成，細(xì)胞問(wèn)橋明顯，團(tuán)塊內(nèi)可見(jiàn)多數(shù)角珠。(見(jiàn)圖1) BOD組：表皮角化過(guò)度，伴有角化不全，棘層肥厚，表

6、皮突延長(zhǎng)增寬，棘細(xì)胞排列紊亂，且大部分細(xì)胞不典型，細(xì)胞大小、形態(tài)不一致，核大而深染，可見(jiàn)角化不良細(xì)胞，基底膜完整。(見(jiàn)圖2、圖3) AK組：角化過(guò)度伴角化不全，表皮下層可見(jiàn)不典型角質(zhì)形成細(xì)胞，核大，染色質(zhì)豐富，細(xì)胞排列有些紊亂，這些不典型角質(zhì)形成細(xì)胞呈芽蕾狀向下增生，真皮淺層膠原示日光彈力變性。(見(jiàn)圖4) 免疫組化結(jié)果：從正常皮膚→到光線性角化病(癌前病變)→BOWEN病(原位癌)→皮膚鱗狀細(xì)胞癌，F(xiàn)HIT的陽(yáng)性表達(dá)位于

7、表皮層，特異性著色位于胞漿或(和)胞核內(nèi)，陽(yáng)性率依次降低；正常皮膚均見(jiàn)FHIT陽(yáng)性表達(dá)，且呈彌漫性分布，而AK、BOD、SCC則呈點(diǎn)片狀或區(qū)域性陽(yáng)性表達(dá)甚至無(wú)表達(dá)。正常皮膚組明顯高于AK組、BOD組、SCC組，差異有顯著性(p＜0.05)；AK組高于BOD組、SCC組，差異有顯著性(p＜0.05)；BOD組與SCC組比較差異無(wú)顯著性(p＞0.05) 流式細(xì)胞分析結(jié)果：(1)熒光指數(shù)(FI)結(jié)果：從正常皮膚→AK組→BOD組→SC

8、C組，F(xiàn)HIT蛋白含量依次降低，各組之間的比較差異性同免疫組化的結(jié)果。 (2)細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)結(jié)果：AK組、BOD組、SCC組均高于正常皮膚組，(P＜0.05)；SCC組、BOD組與AK組比較，差異有顯著性(P＜0.05)。SCC組與BOD組比較，組問(wèn)無(wú)差異，(P＞0.05)。 (3)熒光指數(shù)(FI)與細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)呈明顯的負(fù)相關(guān)，(r=-0.806,p＜0.05)。 (4)DNA指數(shù)(DI)及DNA倍

9、體結(jié)果：各組的DNA含量比較差異性同細(xì)胞增殖指數(shù)。正常皮膚組、AK組均未見(jiàn)非二倍體，而B(niǎo)OD組16例中可見(jiàn)10例出現(xiàn)異倍體，SCC組20例中可見(jiàn)17例出現(xiàn)異倍體。 結(jié)論：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出以下結(jié)論1用免疫組化檢測(cè)，F(xiàn)HIT的表達(dá)主要分布于表皮層。 病變各組的表達(dá)均低于正常皮膚組，而病變各組之間的比較，AK組高于BOD組和SCC組，BOD組和SCC組之間比較無(wú)差異。說(shuō)明FHIT與AK、BOD、SCC的發(fā)生、發(fā)展有相關(guān)性。

10、 2用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，病變各組的細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)和DNA含量(DI)均高于正常對(duì)照組，各組之間比較除BOD組和SCC組無(wú)差異外，其余各組之間的比較均有差異，BOD組和SCC組高于AK組和正常皮膚組，AK組高于正常皮膚組，反映了從正常皮膚到癌前病變(AK)到原位癌(BOD)和侵襲性癌(SCC)，細(xì)胞增殖活性逐漸增強(qiáng)；另外，正常皮膚組和AK組未見(jiàn)異倍體出現(xiàn)，而B(niǎo)OD組和SCC組均可見(jiàn)異倍體的出現(xiàn)，說(shuō)明異倍體的出現(xiàn)也是皮膚癌的一個(gè)重要