RASSF1A在肝癌的表達及其臨床意義.pdf

1、目的：(1)研究原發(fā)性肝癌中RASSF1A基因mRNA表達水平及啟動子區(qū)甲基化水平,探討啟動子甲基化與mRNA表達的關(guān)系。
　　(2)研究原發(fā)性肝癌中RASSF1A基因啟動子的甲基化水平及甲基化與臨床特征的關(guān)系。
　　方法：(1)收集65例原發(fā)性肝癌患者的腫瘤標本及其癌旁組織、10例正常肝組織,應用甲基化特異性PCR測定RASSF1A基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài),分析甲基化與臨床特征的關(guān)系;采用實時熒光定量PCR方法檢測RASSF

2、1A基因mRNA表達水平,分析RASSF1A基因甲基化與mRNA表達的關(guān)系。
　　(2)收集100例原發(fā)性肝癌患者的腫瘤標本及其對應癌旁組織和6株肝癌細胞株及10例正常肝組織,采用甲基化特異性PCR測定RASSF1A基因甲基化狀態(tài),分析甲基化與肝癌臨床特征的關(guān)系。采用甲基化抑制劑5-Aza-CdR處理肝癌細胞株,提取細胞株RNA,利用RT-PCR檢測肝癌細胞株在甲基化抑制劑5-Aza-CdR處理前后RASSF1A基因表達的情況。<

3、br>　　結(jié)果：(1)65例肝癌組織中有41例(63.08％,41/65)存在RASSF1A基因CpG島的異常甲基化,癌旁組織中有10例(15.38%,10/65),而正常肝組織中無RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因異常甲基化在三種組織中的發(fā)生率差別有統(tǒng)計學意義(x2=38.092,P<0.001)。65例原發(fā)性肝癌實時熒光定量PCR分析有38例(58.5%,38/65)肝癌組織中RASSF1A mRNA表達水平對比癌旁組

4、織顯著下調(diào),其中76.32%(29/38)伴有啟動子區(qū)甲基化,即RASSF1A基因mRNA表達下調(diào)與其啟動子區(qū)甲基化有關(guān)(x2=6.884,P<0.01)。
　　(2)100例肝癌組織中有69例(69%,69/100)存在RASSF1A基因CpG島的異常甲基化,癌旁組織中有15例(15%,15/100),6株肝癌細胞株有4株(66.67%,4/6)發(fā)生甲基化,而正常肝組織中無RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因異常甲基

5、化在肝癌組織、癌旁組織及正常肝組織中的發(fā)生率差別有統(tǒng)計學意義(x2=67.75,P<0.001)。RASSF1A基因啟動子甲基化與患者乙肝表面抗原(x2=11.341,P=0.001)及組織分化(x2=10.575,P=0.005)存在一定相關(guān)性。發(fā)生甲基化的4株肝癌細胞株經(jīng)甲基化抑制劑5-Aza-CdR處理后,經(jīng)RT-PCR證實,RASSF1A基因均重新恢復表達。
　　結(jié)論：(1)在肝癌中RASSF1A基因mRNA表達下調(diào),該基

6、因mRNA表達下調(diào)與其啟動子區(qū)甲基化有關(guān),RASSF1A基因缺失或低表達可能在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。
　　(2)原發(fā)性肝癌存在RASSF1A基因CpG島異常甲基化,并與患者乙肝表面抗原及組織分化密切相關(guān)。經(jīng)甲基化抑制劑處理的肝癌細胞株又重新恢復表達,進一步推測CpG島的甲基化可能是導致其基因表達降低的主要原因之一,RASSF1A基因啟動子區(qū)甲基化可能在肝細胞癌發(fā)生、發(fā)展過程中起一定作用。檢測RASSF1A基因啟動子異常