Dickkopf4在肝細胞肝癌中低表達及其臨床意義.pdf

1、研究背景及意義：肝細胞肝癌是第五大惡性腫瘤，也是第三大引起腫瘤相關性死亡的惡性腫瘤。肝細胞肝癌的發(fā)病率有著明顯的性別、地域差異，在我國是最常見的消化道腫瘤之一，我國的肝癌患者約占全球一半以上，已成為威脅我國人民生命健康的重要兇手。作為肝癌中最常見的一種病理類型，肝細胞性肝癌的發(fā)生機制比較復雜，是一個多因素、多途徑和長期作用的結(jié)果。WNT信號通路是眾多肝癌發(fā)生發(fā)展過程研究中一個重要的方向，因為它在腫瘤的發(fā)生、生長、分化、遷移及凋亡中發(fā)揮了

2、重要的作用，其中最經(jīng)典的要數(shù)Wnt∕beta-catenin通路。DKK（Dickkopf）蛋白家族是一組分泌性糖蛋白，主要包括DKK-1,2,3,4四個成員。作為Wnt通路中的一種重要拮抗因子，DKK蛋白能夠調(diào)控Wnt信號通路的異常表達或激活，從而在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。我們在研究中發(fā)現(xiàn)Dickkopf(DKK)4蛋白可能在正常肝臟組織及癌旁組織中高表達，而在肝癌組織中低表達，這提示DKK4的表達變化或許是肝細胞肝癌發(fā)生發(fā)展的重要

3、分子機制之一。因此，通過研究DKK4在肝細胞肝癌中的表達及其臨床病理特征和預后的關系有助于我們進一步明確其發(fā)病機制，考察是否可以將其作為一種原發(fā)性肝癌的臨床標志，并結(jié)合AFP提高肝癌的診斷率以及預后的判斷。
　　目的：研究Dickkopf(DKK)4在肝細胞肝癌組織中mRNA和蛋白水平的表達情況，以及DKK4與β—catenin在蛋白水平表達關系，探討DKK4蛋白表達與患者臨床病理特征及預后生存的關系，為進一步分子機制研究奠定基礎

4、，同時為將來提高患者早期肝癌和復發(fā)轉(zhuǎn)移診斷率開辟一個新的途徑。
　　方法：45例新鮮肝癌組織及其癌旁組織標本、10例正常肝臟組織標本均取自上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院肝臟外科，采用Real time qPCR（探針法）檢測DKK4在上述組織中 mRNA水平表達情況；應用免疫組織化學方法（Immunohistochemistry，SP法）在上述組織中分別檢測DKK4和β-catenin蛋白表達情況，同時對組織芯片中224例肝癌患者

5、DKK4蛋白水平表達情況進行了檢測，以探討其與肝癌患者臨床病理特征間的關系，并通過相應臨床隨訪分析DKK4蛋白表達情況與患者預后有無關系。
　　結(jié)果：Real time qPCR（探針法）結(jié)果顯示DKK4在肝癌組織中mRNA水平表達低于相應的癌旁組織（P＜0.05）；這與性別、年齡、腫瘤大小、AFP、包膜完整與否、分化程度、血管侵潤與否等無明顯相關性（P＞0.05），這一結(jié)果可能與樣本量較少有關。DKK4蛋白在肝癌組織表達也低于相

6、應的癌旁組織（P＜0.05），而其正常肝臟組織中的表達高于其余兩者（P＜0.05），這與mRNA水平表達一致；β-catenin蛋白在肝癌組織中陽性表達率為56.8％，癌旁組織中為31.8%，在肝癌組織中表達高于對應的癌旁組織（p＜0.05），β-catenin蛋白與DKK4蛋白表達密切相關，呈負相關，r=﹣0.4，p=0.006。DKK4蛋白在腫瘤直徑≤5cm、有包膜的肝癌組織中的表達高于腫瘤直徑＞5cm（P=0.037）、無完整包膜

7、（P=0.025）的肝癌組織，DKK4蛋白表達與性別、年齡、是否合并肝硬化、腫瘤數(shù)目、腫瘤分化程度，血管侵潤與否、TNM分級、AFP水平等無明顯相關性（P＞0.05）。DKK4高表達組與低表達組術后總生存時間的比較顯示：DKK4高表達組的累積術后總生存時間大于DKK4低表達組（P=0.03），中位生存時間分別為51月和39月，DKK4蛋白高表達肝癌患者預后生存時間長于低表達者(P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：DKK4

8、mRNA和蛋白水平上肝細胞肝癌組織中低表達，而在癌旁組織及正常肝臟組織中高表達；β-catenin蛋白在肝癌組織中高表達，并且與DKK4蛋白表達密切相關，呈負相關關系，DKK4高表達可能影響β-catenin在細胞核的積累，這與Wnt信號通路中DKK4作用機制相一致；DKK4蛋白高表達肝癌患者預后生存時間長于低表達者；DKK4蛋白水平的表達水平與患者腫瘤大小、有無包膜具有相關性，這些說明DKK4可能是一種抑癌基因，有可能在腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)