正常孕期蛻膜NK樣細(xì)胞特征性分化抗原及殺傷功能變化的動(dòng)態(tài)研究.pdf

1、目的:在妊娠過程中,胎兒作為半同種異體移植物,未被母體排斥,與母胎界面建立的微妙免疫平衡有關(guān),孕期蛻膜免疫微環(huán)境的變化尤為關(guān)鍵。其中蛻膜組織中NK樣大顆粒淋巴細(xì)胞的孕期變化是保證正常妊娠進(jìn)程的中心環(huán)節(jié),有關(guān)正常妊娠過程中,母體蛻膜NK樣細(xì)胞功能變化與其特征性分化抗原及殺傷功能變化之間關(guān)系的機(jī)制研究尚需進(jìn)一步深入。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞技術(shù)分析蛻膜NK樣細(xì)胞在整個(gè)妊娠過程中其數(shù)量及其特征性分化抗原CD、表面受體NKG2A(抑制

2、性受體)、NKG2D(活化性受體)及胞內(nèi)殺傷活性物質(zhì)穿孔素的動(dòng)態(tài)表達(dá)。旨在了解母體受孕后蛻膜NK樣細(xì)胞CD表型轉(zhuǎn)換的發(fā)生機(jī)制及與子宮內(nèi)膜局部免疫微環(huán)境之間的關(guān)系,為揭示妊娠免疫耐受及病理妊娠發(fā)病機(jī)理奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1隨機(jī)取要求人工流產(chǎn)的正常孕早期婦女20例作為孕早期組。隨機(jī)取孕13～27周內(nèi)要求水囊引產(chǎn)或瘢痕子宮行剖宮取胎術(shù)的患者20例作為孕中期組,隨機(jī)取足月剖宮產(chǎn)患者20例作為孕晚期組

3、。隨機(jī)取正常未孕婦女,均為男方精液異常的不孕患者20例作為未孕對照組。各組婦女均無臨床合并癥及妊娠并發(fā)癥。
　　 2臨床無菌取材,機(jī)械分離細(xì)胞法制備內(nèi)膜及蛻膜非貼壁單核細(xì)胞懸液后,用直接熒光標(biāo)記流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測CD3-CD56+NK樣細(xì)胞,CD16+CD56+殺傷性NK樣細(xì)胞及CD16-CD56+非殺傷NK樣細(xì)胞、CD56+NKG2D+NK樣細(xì)胞表面活化性受體及CD56+NKG2A+抑制性受體、CD56+perforin+N

4、K樣細(xì)胞胞內(nèi)活化標(biāo)志在正常妊娠各組間的動(dòng)態(tài)表達(dá)。
　　 3應(yīng)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,對各組檢測指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)后,以O(shè)ne-Way ANOVA方差分析各組內(nèi)膜及蛻膜組織NK樣細(xì)胞的數(shù)量和表面分化抗原簇的表達(dá)是否存在差異,以及各組NK細(xì)胞表面受體NKG2D(活化性受體)和NKG2A(抑制性受體)的表達(dá)及其胞內(nèi)活化標(biāo)志物穿孔素的表達(dá)是否存在差異。
　　 結(jié)果:
　　 1正常孕期蛻膜組織中NK樣

5、細(xì)胞特征性分化抗原的表達(dá)
　　 1.1 CD3-CD56+NK樣細(xì)胞的表達(dá)
　　 與未孕對照組內(nèi)膜組織中CD3-CD56+NK樣細(xì)胞百分率(18.08％±4.76％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進(jìn)性顯著增高(分別為38.94％±4.82％,P＜0.01;75.55％±6.25％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中的百分率(4.06％±1.26％,P＜0.01)顯著降低。妊娠各組間均有顯著差異(P＜0.01)。

6、
　　 1.2 CD16+CD56+NK樣細(xì)胞的表達(dá)
　　 與未孕對照組內(nèi)膜組織中CD16+CD56+NK樣細(xì)胞百分率(5.72％±2.11％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率無顯著變化(分別為5.02％±1.81％,6.03％±1.25％,均P＞0.05),晚孕組蛻膜組織中NK樣細(xì)胞的百分率顯著降低(1.40％±0.36％,P＜0.01);與未孕對照組內(nèi)膜組織中NK樣細(xì)胞CD16+CD56+/CD3-CD56+比

7、率(31.31％±5.63％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的比率呈遞進(jìn)性顯著降低(分別為12.75％±3.76％,8.01％±1.89％,均P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中的比率回升至未孕對照組水平(33.05％±4.63％,P＞0.05)。
　　 1.3 CD16-CD56+NK樣細(xì)胞的表達(dá)
　　 與未孕對照組內(nèi)膜組織中CD16-CD56+NK樣細(xì)胞百分率(12.36％±2.99％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百

8、分率呈遞進(jìn)性顯著增高(分別為33.38％±2.80％,P＜0.01;69.52％±6.58％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中NK樣細(xì)胞的百分率(2.91％±0.94％,P＜0.01)顯著降低;與未孕對照組內(nèi)膜組織中NK樣細(xì)胞CD16-CD56+/CD3-CD56+比率(68.69％±5.63％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的比率呈遞進(jìn)性顯著增高(分別為87.22％±3.73％,P＜0.01;91.94％±1.89％,P＜0.01),

9、晚孕組蛻膜組織中的比率下降恢復(fù)至未孕對照組水平(66.46％±4.42％,P＞0.05)。
　　 2.蛻膜組織中NK樣細(xì)胞表面抑制性受體及活化性受體的表達(dá)與未孕對照組內(nèi)膜組織中CD56+NKG2D+NK樣細(xì)胞百分率(5.53％±0.82％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進(jìn)性顯著增高(分別為12.05％±4.34％,P＜0.01;21.46％±0.67％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中的百分率(1.20％±0.36％

10、,P＜0.01)顯著降低;與未孕內(nèi)膜對照組內(nèi)膜組織中NK樣細(xì)胞CD56+NKG2D+/CD3-CD56+比率(31.33％±5.82％)相比,早孕組、中孕組、晚孕組蛻膜組織中的比率(分別為30.78％±9.05％,28.53％±1.75％,27.90％±4.00％,均P＞0.05)無顯著變化。
　　 與未孕對照組內(nèi)膜組織中CD56+NKG2A+NK樣細(xì)胞百分率(3.76％±0.79％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進(jìn)

11、性顯著增高(分別為8.53％±3.08％,P＜0.01;13.55％±0.78％,P＜0.01),晚孕組蛻膜組織中NK樣細(xì)胞的百分率(1.14％±0.36％,P＜0.01)顯著降低;與未孕對照組內(nèi)膜組織中NK樣細(xì)胞CD56+NKG2A+/CD3-CD56+比率(21.54％±4.83％)相比,早孕組蛻膜組織中的比率(21.67％±6.34％,P＞0.05)無顯著變化,中孕組比率(18.03％±0.82％,P＜0.01)顯著降低,晚孕組(

12、26.38％±4.04％,P＜0.01)顯著增高。
　　 與未孕對照組內(nèi)膜組織中NK樣細(xì)胞CD56+NKG2A+/CD56+NKG2D+比值(0.67:1±0.09)相比,早孕組蛻膜組織中的比值(0.70:1±0.04,p＞0.05)無顯著變化,中孕組比值(0.62:1±0.20,P＜0.01)顯著降低,晚孕組(0.94:1±0.23,P＜0.01)顯著增高。
　　 3.蛻膜組織中NK樣細(xì)胞殺傷功能的檢測
　　

13、與未孕對照組內(nèi)膜組織中NK樣細(xì)胞CD56+perforin+百分率(4.36％±0.71％)相比,早孕組、中孕組蛻膜組織中的百分率呈遞進(jìn)性顯著降低(分別為2.89％±0.49％,P＜0.01;3.01％±0.72％,P＜0.01),晚孕組百分率有所回升(3.54％±0.91％)但仍低于未孕對照組(P＜0.01);與未孕對照組內(nèi)膜組織中NK樣細(xì)胞CD56+perforin+/CD3-CD56+比率(24.98％±4.29％)相比,早孕組、

14、中孕組蛻膜組織中的比率(分別為7.42％±0.54％,3.96％±0.70％,均P＜0.01)呈遞進(jìn)性顯著降低,晚孕組(85.09％±7.05％,P＜0.01)顯著升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.妊娠子宮蛻膜組織中NK樣細(xì)胞數(shù)量從孕早期開始逐漸升高至孕中期達(dá)高峰,隨后逐漸降低,同時(shí)伴隨著胞內(nèi)穿孔素表達(dá)的相應(yīng)動(dòng)態(tài)變化。
　　 2.NK樣細(xì)胞CD表型的變化,早期以CD16-CD56+占優(yōu)勢,至孕晚期NK樣細(xì)胞向CD1