藏藥魯堆多吉有效成分含量的測定及其總皂苷對大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞影響的研究.pdf

1、目的:近年來,男性不育發(fā)生率逐年升高,生殖健康已成為科學(xué)研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。尋找安全有效、天然無害并具有調(diào)節(jié)生殖功能的物質(zhì)對人類的生殖健康有重要意義。
　　 本研究以藏藥魯堆多吉(藏黨參)--長花黨參(Codonpsisthalictrifolia Wall.)為研究對象,測定了藏黨參的總皂苷和總黃酮的含量,并對藏黨參總皂苷如何影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能進(jìn)行了初步探索研究,為藏黨參的活性成分對雄性生殖功能的影響提供確定科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。<

2、br>　　 方法：利用單因素實(shí)驗(yàn)確定提取藏黨參總皂苷的最佳提取方法,并比較藏黨參和潞黨參活性成分的差異;建立體外培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)技術(shù);利用高效液相色譜法測定睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌量以及cAMP含量;通過測定細(xì)胞內(nèi)的MDA含量,SOD活力及GSH的含量,研究藏黨參總皂苷對體外培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的影響。
　　 結(jié)果：單因素實(shí)驗(yàn)確定當(dāng)提取濃度達(dá)到80％,提取次數(shù)為3次時(shí),藏黨參總皂苷的得率最多。
　　 研究結(jié)果顯示藏黨參

3、和潞黨參總皂苷的含量分別是3.02％和2.48％,總黃酮的含量分別為0.0875％和0.0921％。
　　 睪丸間質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,通過臺(tái)盼藍(lán)排斥實(shí)驗(yàn)和睪酮的基礎(chǔ)分泌都證明了本實(shí)驗(yàn)離體大鼠的睪丸間質(zhì)細(xì)胞的功能良好,結(jié)果顯示離體培養(yǎng)32h內(nèi)細(xì)胞活率高達(dá)約98％。
　　 研究發(fā)現(xiàn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的睪酮分泌量與藏黨參給藥濃度相關(guān)。在不同藏黨參給藥濃度實(shí)驗(yàn)中,隨著給藥濃度的增加睪酮分泌量增高,給藥濃度為0.3mg/mL,0.4mg

4、/mL時(shí)給藥組均與空白對照組有顯著差異(P＜0.05),之后隨著給藥濃度的增加睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌量降低。
　　 在不同藏黨參培養(yǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中,給藥組分泌的睪酮含量均比空白組分泌的睪酮量高,而且1h,2h,4h,8h,16h,32h組均與空白對照組有顯著差異(P＜0.05),4h組與空白對照組有極顯著的差異(P＜0.01)。
　　 在睪丸間質(zhì)細(xì)胞cAMP含量的測定結(jié)果顯示隨著給藥濃度的增加,cAMP含量也逐漸增加,當(dāng)給藥濃

5、度為0.4mg/mL時(shí)達(dá)到高峰,之后隨著濃度的增加睪丸間質(zhì)細(xì)胞cAMP含量降低。這個(gè)趨勢與睪酮的分泌量正吻合。
　　 MTT比色法測定細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),藏黨參總皂苷使細(xì)胞數(shù)量下降,但是睪酮的分泌量仍然增加。細(xì)胞群分泌睪酮的總量取決于有分泌功能的細(xì)胞數(shù)量和單個(gè)細(xì)胞的分泌能力兩個(gè)方面,MTT比色法結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)中單個(gè)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的分泌能力有所增強(qiáng)。
　　 當(dāng)藏黨參總皂苷的給藥濃度為0.4 mg/mL和培養(yǎng)時(shí)間為4h時(shí),大鼠睪

6、丸間質(zhì)細(xì)胞的MDA的含量顯著性降低(P＜0.05),SOD的活力降低(P＜0.01),谷胱甘肽的含量增加(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,單因素提取條件得到的藏黨參總皂苷的得率最多。
　　 藏黨參總皂苷的含量高于潞黨參總皂苷含量,而其總黃酮的含量略低于潞黨參總黃酮。
　　 藏黨參總皂苷低劑量促進(jìn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌和cAMP的含量,高劑量抑制睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌和cAMP的含量,推測藏黨參總