Poly（A）增強(qiáng)siRNA對外源基因沉默效應(yīng)的作用及其機(jī)制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、RNA干擾已經(jīng)成為基因功能研究的強(qiáng)大工具。在本論文中，發(fā)現(xiàn)poly(A)在MCF-7細(xì)胞中能夠非特異的增強(qiáng)siRNA對外源基因的沉默效應(yīng)。以外源報告基因綠色熒光蛋白(EGFP)和紅色熒光蛋白(RFP)為靶標(biāo)，放棄了通常在siRNA3’端添加UU的設(shè)計思路，依靠體外轉(zhuǎn)錄的方法在siRNA反義鏈的3’端加上了單鏈的poly(A)尾巴，制備了siRNA-poly(A)分子，并探索了siRNA-poly(A)與外源基因沉默間的關(guān)系，同時對其發(fā)生

2、機(jī)制進(jìn)行了初步研究。研究結(jié)果顯示，siRNA-poly(A)相對于原型siRNA而言具有更強(qiáng)的沉默外源基因的能力，這種增強(qiáng)作用與poly(A)序列和長度密切相關(guān)，是一種不依賴于siRNA序列的非特異作用。研究表明，大于50nt的單鏈poly(A)能夠非特異抑制外源基因的表達(dá)，提示poly(A)是非特異增強(qiáng)沉默作用的誘發(fā)因素。進(jìn)一步研究揭示，siRNA-poly(A)在體內(nèi)、體外皆能夠激活雙鏈RNA依賴的蛋白激酶(PKR)和降低外源基因m

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