Intermedin-Adrenomedullin 2和受體在大鼠間斷低氧性肺動脈高壓中變化及意義.pdf

1、第一部分，目的：建立無特殊病原體標(biāo)準(zhǔn)(SPF)級大鼠睡眠呼吸暫停綜合征(SAS)動物模型. 方法：SPF級SD雄性大鼠50只隨機(jī)分為正常對照組(NC)、空氣模擬2周對照組(2C)、空氣模擬4周對照組(4C)、間斷低氧.復(fù)氧2周組(2H)和間斷低氧-復(fù)氧4周組(4H).2H、4H組進(jìn)自制低氧艙,每天間斷低氧8h,艙內(nèi)循環(huán)充入氮氣和氧氣,循環(huán)時間自動控制,每次循環(huán)90秒;艙內(nèi)氧濃度最高21﹪±0.5﹪、最低9﹪±1.5﹪.2C、4C

2、組置于與間斷低氧艙相似的艙內(nèi),循環(huán)充入空氣.NC組不進(jìn)艙.實驗時間終點,頸外靜脈和頸總動脈插管分別測定右心功能(RVEDP、RVESP、RV±dp/dt max)和肺、體循環(huán)壓力(mPAP、mCAP).并測定(LV+S)/WT和RV/(LV+S)作為左、右心室肥大指標(biāo). 結(jié)果：mPAP:2H組較2C組高18.7l﹪,4H組較4C組高16.87﹪(P均<0.05);4H組RV+dp/dt、RV-dp/dt、RVESP較4C組分別高

3、56.35﹪、55.43﹪、36.36﹪(P均<0.01),較2H組高80.97﹪、88.85﹪、19.49﹪(P均<0.01).(LV+S)/WT、RV/(LV+S)及mCAP各組間無顯著性差異(P均>0.05).NC、2C和4C組上述指標(biāo)各組間均無顯著性差異(P均>0.05). 結(jié)論：本模型操作簡便、控制精確、重復(fù)性佳,早期即可引起肺動脈壓升高,適合研究SAS的肺動脈壓發(fā)生機(jī)制. 第二部分，Intermedin/ad

4、renomedullin 2及受體系統(tǒng)在大鼠間低氧-復(fù)氧性肺動脈高壓中的變化和意義 目的：研究小分子生物活性肽、CGRP家族新成員intermedin/adrenomedullin2(IMD/ADM2)及受體在大鼠間斷低氧-復(fù)氧(O<,2>)性肺動脈高壓發(fā)生、發(fā)展過程中的變化和可能的作用. 方法：(1)建立間斷低氧一復(fù)氧性肺動脈高壓大鼠模型:SPF級SD雄性大鼠50只隨機(jī)分為正常對照組(NC)、空氣模擬2周對照組(2C)

5、、空氣模擬4周對照組(4C)、間斷低氧.復(fù)氧2周組(2HH)和間斷低氧-復(fù)氧4周組(4HH).2HH、4HH組每天間斷低氧8h,艙內(nèi)循環(huán)充入氮氣和氧氣,循環(huán)時間自動控制,每次循環(huán)90秒;艙內(nèi)氧濃度最高21﹪±0.5﹪、最低9﹪±1.5﹪.2C、4C組置于與間斷低氧艙相似的艙內(nèi),循環(huán)充入空氣.NC組不進(jìn)艙.實驗時間終點,頸外靜脈和頸總動脈插管分別測定右心功能(RVEDP、RVESP、RV±dp/dt max)和肺、體循環(huán)壓力(mPAP、m

6、CAP).并測定(LV+S)/WT和RV/(LV+S)作為左、右心室肥大指標(biāo).(2)免疫組化法測定肺組織和右心室IMD/ADM2的表達(dá)部位,并對其表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析.(3)放射免疫(radioimmunoassay,RIA)法測定血漿、右心室和肺組織勻漿IMD/ADM2含量.(4)逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chainreaction,RT-PCR)半定量檢測右心室和肺組織

7、IMD/ADM2 mRNA及CRLR/RAMPs mRNA水平. 結(jié)果：(1)間斷低氧.復(fù)氧組大鼠肺動脈壓力增高,右心室功能改變.mPAP:2HH組較2C組高18.71﹪,4HH組較4C組高16.87﹪(P圴<0.05);4HH組RV+dp/dt、RV-dp/dt、RVESP較4C組分別高56.35﹪、55.43﹪、36.36﹪(P均<0.01),較2HH組高80.97﹪、88.85﹪、19.49﹪(P均<0.01).(LV+S

8、)/WT、RV/(LV+S)及mCAP各組間無顯著性差異(P均>0.05).上述各項指標(biāo)在NC、2C和4C各組間均無顯著性差異.(2)血漿、肺組織IMD濃度變化均表現(xiàn)出隨間斷低氧-復(fù)氧時間延長而呈漸增的趨勢;但心肌組織濃度無明顯變化.血漿IMD水平:4HH組最高,為NC組和2HH組的7倍和2.6倍(P均<0.01);2HH組比NC組高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義.肺組織勻漿IMD濃度:2HH組略高于NC組,其差異無統(tǒng)計學(xué)意義;4HH組分別為NC

9、組和2HH組的3.8倍和3.4倍(P均<0.01).右心室IMD濃度變化不及血漿和肺組織顯著,多組間比較,其總體方差無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.965),兩兩比較結(jié)果亦無統(tǒng)計學(xué)意義(O均>0.05).(3)心肌組織CRLR、RAMPl和RAMP3的mRNA表達(dá)先下降再上調(diào),IMD及RAMP2 mRNA表達(dá)無明顯變化.CRLR mRNA相對含量:4HH組較NC組、2HH組分別高52.7﹪(P<0.01)、125.4﹪(P<0.01),2HH組低

10、于NC組32.3﹪(P<0.05).RAMP1 mRNA相對含量:2HH組低于NC組34.4﹪,4HH組高于NC組50﹪,但兩者差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);4HH組較2HH組高128.6﹪(P<0.05).RAMP3 mRNA相對含量:2HH組低于NC組45﹪(P>0.05),4HH組分別高于NC組65﹪(P>0.05)和2HH組3倍(P<0.05).IMD、RAMP2 mRNA相對含量各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義. (4)與心肌組

11、織的基因表達(dá)有所不同,肺組織IMD及CRLR/RAMPs mRNA的表達(dá)隨間斷低氧時間的延長呈上調(diào)趨勢,在低氧2周時其基因表達(dá)增加無統(tǒng)計學(xué)意義,但到4周時,基因表達(dá)增加非常顯著.IMDmRNA相對含量:4HH顯著高于NC組、2HH,前者依次較后兩者高約一倍(P<0.05).CRLR mRNA相對含量:4HH顯著高于NC組、2HH,前者依次較NC組高72.9﹪,較2HH組高45﹪(P均<0.05).RAMPl mRNA相對含量:4HH組顯

12、著高于NC組105﹪、高于2HH組64.9﹪(P均<0.01). RAMP2 mRNA相對含量:4HH組顯著高于NC組109﹪(P<0.05)、高于2HH組28﹪(P>0.05).RAMP3 mRNA相對含量:4HH組分別高于NC、2HH組37﹪和31.6﹪(P均>0.05). (5)免疫組化染色:肺組織IMD陽性表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞和支氣管粘膜上皮,半定量分析顯示:4HH組陽性表達(dá)明顯強(qiáng)于NC和2HH組,分別高出3