Klotho基因在糖尿病腎病小鼠模型的表達(dá)及腎安顆粒的干預(yù)作用.pdf

1、糖尿病腎?。―N）是糖尿病(DM)代謝異常引發(fā)的腎小球硬化癥，是國內(nèi)外引起終末期腎?。‥SRD）的常見病因。由于DN患者機(jī)體存在及其復(fù)雜的代謝紊亂，一旦發(fā)展至ESRD，治療上往往更加困難，因此，探索其發(fā)病機(jī)制，以制定更加行之有效的防治手段，已成為當(dāng)前內(nèi)分泌學(xué)界和腎臟病學(xué)界迫切的愿望。
　　目的:建立DN小鼠模型并檢測血生化變化情況,探討 Klotho（KL）基因在DN小鼠的表達(dá)及腎安顆粒的干預(yù)作用。
　　方法:62只C57B

2、L／6小鼠隨機(jī)分成：正常對照組（A組，n=12），模型組(B組，n=12)、氯沙坦組(C組，n=12)、腎安顆粒低劑量組(D組，n=13)、腎安顆粒高劑量組(E組，n=13)。予鏈脲佐菌素（STZ）150 mg/kg單次腹腔注射造成糖尿病腎病模型。進(jìn)行藥物干預(yù)治療，正常對照組及模型組小鼠灌服蒸餾水10ml/(kg2 d)；氯沙坦組灌服氯沙坦混懸液，劑量為為10ml/(kg2d)；腎安顆粒高、低劑量組均灌服腎安顆?；鞈乙?，劑量分別為4ml

3、/(kg2d)及8ml/(kg2d)。藥物干預(yù)時(shí)間為8周。用藥前后檢測各組小鼠血、尿生化。采血結(jié)束后，左腎制作光鏡、電鏡切片；右腎-70℃冰箱凍存?zhèn)溆茫捎肦T-PCR檢測小鼠腎臟 KL mRNA的表達(dá)；采用Western-blot檢測腎臟KL蛋白、Wnt1蛋白、β-catenin蛋白、nephrin蛋白、E-cadherin蛋白。
　　結(jié)果:藥物干預(yù)期間，4只小鼠死亡，最終共58只小鼠納入實(shí)驗(yàn)。給藥前：B組、C組、D組、E組血、

4、尿生化與A組比較明顯升高；B組、C組、D組、E組組間比較無明顯差異。給藥后：A組血、尿生化與給藥前無明顯差異；B組血、尿生化與給藥前比較明顯升高；C組、D組、E組尿生化、腎功能、血脂與給藥前比較明顯降低,但肝功能給藥前比較無明顯差異；腎臟病理：A組腎組織結(jié)構(gòu)正常。B組腎小球肥大，毛細(xì)血管基底膜彌漫增厚，系膜基質(zhì)增生，少量系膜細(xì)胞增生，足突融合、甚至脫落、纖維化明顯、球囊擴(kuò)張明顯。藥物干預(yù)治療后腎臟病理結(jié)構(gòu)較B組改善。
　　各組小鼠

5、腎臟KL mRNA及KL蛋白：B組、C組、D組、E組KL mRNA及KL蛋白與A組比較明顯下降；C組、D組、E組與B組比較明顯增強(qiáng)；C組與 E組表達(dá)相當(dāng)，但較 D組上調(diào)。Wnt1蛋白及β-catenin蛋白：B組、C組、D組、E組Wnt1及β-catenin蛋白表達(dá)與A組比較明顯增多；C組、D組、E組與B組比較明顯減少；C組與E組表達(dá)相當(dāng)，但較D組下調(diào)。nephrin蛋白：B組、C組、D組、E組nephrin蛋白表達(dá)與A組比較明顯減少；

6、C組、D組、E組與B組相比較明顯增多；C組與D組表達(dá)相當(dāng)，但較E組下調(diào)。E-cadherin蛋白：B組、C組、D組、E組E-cadherin蛋白表達(dá)與A組比較明顯減少；C組、D組、E組與B組相比較明顯增多；C組與E組表達(dá)相當(dāng)，但較D組下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.單次腹腔注射STZ(150mg/kg)能成功誘導(dǎo)C57BL／6小鼠DN模型。
　　2.糖尿病腎病模型小鼠發(fā)生蛋白尿、腎功能異常、糖及脂質(zhì)代謝異常。
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