實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)急性早幼粒白血病PML-RARα融合基因mRNA表達(dá)量方法的建立及臨床應(yīng)用.pdf

1、目的: 研究通過(guò)實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)PML/RARα融合基因mRNA轉(zhuǎn)錄本在治療過(guò)程中的改變，分析急性早幼粒細(xì)胞白血病患者在以砷劑為主的序貫治療不同階段的微小殘留病水平，評(píng)估患者對(duì)治療的反應(yīng)，及早預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)，指導(dǎo)個(gè)體化治療。 方法: 收集我院血液科和深圳市其他醫(yī)院血液科2003年1月～2006年2月的急性早幼粒細(xì)胞白血病的骨髓標(biāo)本，采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)，用Taqman探針檢測(cè)這些患者的PML/RAR

2、α融合基因3種常見類型的mRNA在以砷劑為主的序貫治療的不同階段的表達(dá)量。 結(jié)果: 1.實(shí)時(shí)定量RT-PCR的敏感度為101拷貝數(shù)/ul，標(biāo)準(zhǔn)品日間差異及日內(nèi)差異均＜5％。 2.29例PML/RARα融合基因陽(yáng)性的急性早幼粒白血病初治患者，19例為PML/RARα融合基因L型異構(gòu)體；10例為PML/RARα融合基因S型異構(gòu)體。29例初治患者PML/RARα融合基因異構(gòu)體L型及S型標(biāo)準(zhǔn)拷貝數(shù)(normalizedc

3、opynumber,NCN)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，均數(shù)為1.43％。 3.PML/RARα融合基因異構(gòu)體L型患者在發(fā)病時(shí)外周血白細(xì)胞總數(shù)為6.08±13.21(×109/l)較S型患者15.11±20.26(×109/l)低，P＜0.01、血紅蛋白74.1±22.78(g/l)較S型患者92.8±20.30(g/l)低，P＜0.01、血小板總數(shù)41.86±22.16(×109/l)較S型患者30.54±22.16(×109/l)高，

4、P＜0.01，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；年齡、性別組成、骨髓幼稚細(xì)胞比例、熒光原位雜交(FISH)融合基因陽(yáng)性細(xì)胞比例、患者經(jīng)治療達(dá)到緩解時(shí)間兩者未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.隨訪治療后6月的6名患者，1人PML/RARα融合基因MRD值降低1個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)；3人PML/RARα融合基因MRD值2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)；2人實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)陰性，即PML/RARα融合基因MRD值至少降低3個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)，達(dá)到分子生物學(xué)緩解；治療后12月復(fù)查的4名患者，3人轉(zhuǎn)為

5、陰性，1人PML/RARα融合基因MRD值由降低2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)轉(zhuǎn)為降低3個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)；1名患者治療后18月復(fù)查PML/RARα融合基因仍為陽(yáng)性，該患者治療后30月復(fù)查PML/RARα融合基因?yàn)殛幮裕?名患者治療后36月復(fù)查，實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)PML/RARα融合基因基因均為陰性。 5.1例通過(guò)熒光原位雜交(FISH)檢測(cè)PML/RARα融合基因陰性的患者通過(guò)定量RT-PCR檢測(cè)為PML/RARα融合基因陽(yáng)性，經(jīng)測(cè)序證實(shí)為PML/R